本文關鍵詞：TLR5和NLRC4通路對乳腺癌細胞增殖和部分免疫細胞的影響

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【摘要】：目的:通過重組鞭毛素蛋白探究TLR5和NLRC4通路在抑制人乳腺癌細胞增殖中的作用及其對小鼠中性粒、NK細胞、DC和Treg細胞的影響。方法:試驗中用到四種重組鞭毛素蛋白:FliC(激活TLR5和NLRC4),FliCΔ90-97(激活NLRC4),FliC-L3A(激活TLR5),FliCΔ90-97:L3A(不激活TLR5和NLRC4)。1.IPTG誘導表達和鎳離子親和層析法純化重組沙門氏菌鞭毛素蛋白,通過檢測IL-8和IL-1β檢驗重組鞭毛素蛋白激活TLR5和NLRC4的生物學活性。2.qRT-PCR法檢測乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231細胞中TLR5和NLRC4的表達;采用CCK8法和克隆形成實驗檢測重組鞭毛素蛋白對乳腺癌細胞增殖的影響,Western-blot檢測NF-κB(TLR5)和P10(NLRC4)通路激活情況。3.流式細胞術檢測小鼠中性粒細胞,NK細胞,DC和Treg的比例及表面分子。結果:1.重組鞭毛素蛋白的純度95%,內(nèi)毒素殘留0.01EU/mg蛋白,重組鞭毛素蛋白具有生物學活性。2.重組鞭毛素蛋白對MCF-7和MDA-MB-231細胞有抑制作用,在0.1μg/ml時,MCF-7細胞各組抑制率20%。Western-blot結果顯示,在MCF-7細胞FliC和FliC-L3A組胞核蛋白中NF-κB高于對照組,FliC和FliCΔ90-97組檢測到caspase1 P10片段。3.流式結果顯示FliC、FliCΔ90-97和FliC-L3A使腹腔中性粒細胞和NK細胞比例增加,分別為(8.41±0.04)%和(9.9±2.6)%;(9.1±2.1)%和(10.3±0.3)%;(8.0±0.3)%和(11.0±2.6)%,PBS組為(2.6±1.3)%和(3.2±0.2)%。FliC和FliC-L3A組DC細胞上CD80和CD86表達上調(diào)與對照組相比有統(tǒng)計學差異(P0.05)。FliC-L3A組調(diào)節(jié)性T細胞高于其他組。結論:1.重組鞭毛素蛋白對MCF-7細胞的抑制不完全依賴TLR5或NLRC4,可能存在其他機制。2.TLR5和NLRC4通路在對中性粒和NK細胞的趨化中起重要作用。3.重組鞭毛素蛋白主要通過TLR5通路上調(diào)DCs表面CD80和CD86。
【關鍵詞】：重組鞭毛素蛋白 TLR5 NLRC4 免疫細胞 樹突狀細胞
【學位授予單位】：貴州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-8
• 英文略縮詞表8-9
• 引言9-10
• 材料與方法10-26
• 結果26-37
• 討論37-41
• 結論41-42
• 參考文獻42-45
• 綜述45-53
• 參考文獻50-53
• 作者簡歷53-54
• 致謝54-55
• 學位論文數(shù)據(jù)集55

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本文編號：794632