發(fā)布時間：2017-09-01 22:22

  本文關鍵詞：環(huán)氧合酶2在胃癌血管生成擬態(tài)形成中的作用及其分子機制

  更多相關文章： COX-2 胃癌 血管生成擬態(tài) 侵襲 遷移 上皮間質轉換

【摘要】：研究背景和目的:胃癌是常見惡性腫瘤之一,近幾年其發(fā)病率呈下降趨勢,但在癌癥相關的死亡統(tǒng)計中,其死亡率仍居高不下。血管生成擬態(tài)(Vasculogenic mimicry)VM是一種全新的腫瘤微循環(huán)供給模式,它與腫瘤的侵襲、轉移和患者較差的生存預后密切相關。已有研究報道在多種惡性腫瘤中存在VM,如乳腺癌、肝癌、結腸癌等,但VM在胃癌中的報道卻很少見。本研究的主要目的是研究胃癌中是否存在VM,并分析VM與臨床病理參數(shù)的關系,并進一步探Cyclooxygenase-2參與胃癌VM形成的可能性及相關機制。研究方法:1)通過CD31/PAS雙染實驗標記VM,并分析VM與胃癌患者病理資料、生存預后的關系。2)免疫組化染色實驗檢測胃癌標本COX-2、PGE2、Snail的表達情況,分析COX-2與臨床病理資料、生存預后的關系,并探討COX-2、PGE2、Snail與VM存在的關系及COX-2與PGE2、Snail表達的相關性。3)根據(jù)COX-2的表達情況,選擇低表達COX-2的MKN74胃癌細胞系和高表達COX-2的MKN45胃癌細胞系。對MKN74細胞構建COX-2上調模型,對MKN45細胞構建COX-2下調模型。利用Western-Blotting及RT-PCR鑒定COX-2轉染效果。4)通過體外三維培養(yǎng)實驗分析COX-2過表達對胃癌細胞系MKN74細胞形成VM管狀結構能力的影響;COX-2降表達對MKN45細胞形成VM管狀結構能力的影響;并檢測VE-Cadherin的變化。5)細胞劃痕和Transwell實驗檢測COX-2表達的變化對胃癌細胞遷移、侵襲能力的影響。6)Western Blotting檢測過表達COX-2對MKN74細胞PGE2、Snail、EMT相關蛋白(E-Cadherin、Vimentin)表達的影響;降表達COX-2對MKN45細胞中PGE2、Snail、EMT相關蛋白(E-Cadherin、Vimentin)表達的影響。7)對MKN74細胞構建Snail上調模型,對MKN45細胞構建Snail下調模型。利用Western Blotting檢測轉染效果。Western Blotting檢測過表達Snail對MKN74細胞中EMT相關蛋白(E-Cadherin、Vimentin)表達的影響;降表達Snail對MKN45細胞中EMT相關蛋白(E-Cadherin、Vimentin)表達的影響。8)通過體外三維培養(yǎng)實驗分析Snail過表達對MKN74細胞形成VM管狀結構能力的影響;Snail降表達對MKN45細胞形成VM管狀結構能力的影響。9)細胞劃痕和Transwell實驗檢測Snail的變化對胃癌細胞遷移、侵襲能力的影響。結果:1)通過CD31/PAS染色證實胃癌中存在VM,100例胃癌組織中有35例存在VM結構,(35/100,35%)。VM的存在與胃癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、TNM分期無關(p=0.284;p=0.946;p=0.850;p=0.232),VM的存在與胃癌患者的Lauren,s分型、淋巴結轉移和遠處轉移相關,差異具有統(tǒng)計學意義(p=0.029;p=0.020;p=0.018)。單因素生存分析表明,有VM組平均生存期為54.9個月,無VM組平均生存期為25.7個月,同一生存率下,有VM組比無VM組生存期短,差異具有統(tǒng)計學意義(p=0.001)。2)胃癌中COX-2的表達與胃癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、Lauren,s分型、TNM分期未見明顯差別(p=0.191;p=0.480;p=0.368;p=0.462;p=0.514),但COX-2的陽性表達與患者的淋巴結轉移相關,差異具有統(tǒng)計學意義(p=0.025);有遠處轉移組COX-2的陽性率(75%,27/36)明顯高于無遠處轉移組(53.2%,33/62),差異具有統(tǒng)計學意義(p=0.022)。Kaplan-Meier單因素生存曲線比較胃癌中COX-2陽性組與COX-2陰性組的生存率,結果表明COX-2陽性組平均生存時間為61.9個月,COX-2陰性組平均生存時間為31.9個月,COX-2陽性組比COX-2陰性組生存期短,差異具有統(tǒng)計學意義(p=0.002)。3)免疫組化實驗結果顯示,在胃癌中,有VM組COX-2、PGE2、Snail的陽性率均高于無VM組,差異具有統(tǒng)計學意義(p=0.032;p=0.013;p=0.012);Spearman相關分析表明,COX-2的表達與PGE2、Snail的表達呈正相關(p0.05)。4)檢測MKN74、MKN45兩種胃癌細胞系,MKN74在mRNA和蛋白水平低表達COX-2,MKN45在m RNA和蛋白水平高表達COX-2。5)感染LV-COX-2慢病毒后,MKN74細胞的COX-2蛋白表達明顯上調,感染LV-sh COX-2慢病毒后,MKN45細胞的COX-2蛋白表達明顯下調。6)體外三維培養(yǎng)實驗表明,過表達COX-2能夠促進MKN74細胞管腔樣結構的形成,沉默COX-2表達可抑制MKN45細胞管腔樣結構的形成。上調COX-2表達可以上調MKN74細胞VE-Cadherin蛋白的表達,下調COX-2表達可抑制MKN45細胞VE-Cadherin的表達。7)MKN74細胞上調COX-2后,其遷移、侵襲能力明顯增強;MKN45細胞下調COX-2后,其遷移、侵襲能力明顯減弱。8)隨著COX-2表達的變化,細胞表型出現(xiàn)相應的變化;WB結果表明,MKN74胞上調COX-2表達后,E-Cadherin蛋白表達的表達下調,Vimentin、Snail、PGE2的表達上調。MKN45細胞下調COX-2表達后,E-Cadherin表達上調,Vimentin、Snail、PGE2表達隨之下調。9)MKN74細胞感染LV-Snail慢病毒后,其Snail表達明顯上調;MKN45細胞感染LV-sh Snail慢病毒后,可以顯著下調Snail的表達。10)WB結果表明,上調Snail可促進MKN74細胞EMT的發(fā)生,下調Snail可以抑制MKN45細胞EMT的發(fā)生。11)三維培養(yǎng)實驗表明,上調Snail能夠促進MKN74細胞管腔樣結構的形成,下調Snail表達可抑制MKN45細胞管腔樣結構的形成;MKN74上調Snail表達后,可以促進MKN74細胞的遷移和侵襲,下調Snail表達的MKN45胃癌細胞其遷移、侵襲能力明顯減弱。結論:1)胃癌中存在VM這種微循環(huán)模式,VM的存在與胃癌患者的Lauren,s分型、淋巴結轉移和遠處轉移相關,VM是評估胃癌患者預后的一個獨立危險因素。2)在100例胃癌中有60例COX-2表達陽性;COX-2與其胃癌患者的淋巴結轉移和遠處轉移相關,COX-2的陽性表達是評估胃癌患者預后的一個獨立危險因素。3)上調Snail表達后,可誘導胃癌細胞EMT的發(fā)生,同時促進胃癌細胞VM的形成,并促進胃癌細胞的侵襲和遷移。4)COX-2可以通過誘導胃癌細胞發(fā)生EMT、上調VE-Cadherin的表達促進胃癌細胞VM的形成,并增強胃癌細胞的侵襲、遷移能力。
【關鍵詞】：COX-2 胃癌 血管生成擬態(tài) 侵襲 遷移 上皮間質轉換
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 縮略語13-14
• 前言14-18
• 研究現(xiàn)狀、成果14-17
• 研究目的、方法17-18
• 一、COX-2 在胃癌中的表達及其與VM及EMT的關系18-35
• 1.1 對象與方法18-21
• 1.1.1 臨床資料18-19
• 1.1.2 免疫組化染色19-21
• 1.1.3 免疫組化判讀21
• 1.1.4 統(tǒng)計學方法21
• 1.2 結果21-29
• 1.2.1 所選取胃癌患者的基本情況21
• 1.2.2 胃癌中VM的形態(tài)學觀察21-23
• 1.2.3 胃癌中VM與臨床病理資料的關系23-24
• 1.2.4 胃癌中有VM組與無VM組的生存分析24-25
• 1.2.5 胃癌組織中COX-2 表達與臨床病理資料的關系25-27
• 1.2.6 胃癌中COX-2 陽性組與COX-2 陰性組的生存分析27
• 1.2.7 胃癌組織中VM、COX-2 的多因素分析27-28
• 1.2.8 胃癌組織中VM與COX-2、PGE2、Snail表達的關系28
• 1.2.9 胃癌中COX-2 的表達與PGE2、Snail表達的相關性分析28-29
• 1.3 討論29-34
• 1.3.1 胃癌中VM存在的臨床意義29-31
• 1.3.2 胃癌中COX-2 的表達及臨床意義31-32
• 1.3.3 COX-2、PGE2、Snail在胃癌VM形成中的作用32-34
• 1.4 小結34-35
• 二 COX-2 增強胃癌細胞遷移、侵襲和VM形成的體外研究35-63
• 2.1 對象和方法35-46
• 2.1.1 實驗材料35-38
• 2.1.2 研究方法38-45
• 2.1.3 統(tǒng)計學分析45-46
• 2.2 結果46-56
• 2.2.1 COX-2 過表達、降表達對胃癌細胞的影響46-52
• 2.2.2 Snail過表達、降表達對胃癌細胞的影響52-56
• 2.3 討論56-62
• 2.4 小結62-63
• 全文結論63-64
• 參考文獻64-72
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明72-73
• 綜述 COX-2 在癌癥中的研究現(xiàn)狀及進展73-90
• 綜述參考文獻82-90
• 致謝90-91
• 個人簡歷91

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本文編號：774746