本文關鍵詞：miR-375在結(jié)直腸癌中的調(diào)控機制研究

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【摘要】：結(jié)直腸癌(colorectal cancer, CRC)是發(fā)生在大腸粘膜上皮的惡性腫瘤,近年來發(fā)病率和死亡率呈全球性上升。CRC的早期診斷與治療可顯著提高生存率,因此尋找特異性的CRC腫瘤標記物,及研究其發(fā)病機理有一定的現(xiàn)實意義。 microRNA (miRNA)是生物體內(nèi)源性非編碼RNA,與諸多惡性腫瘤的發(fā)生與遷移密切相關,具有作為腫瘤標記物及治療靶標的潛力。在結(jié)直腸癌中,我們發(fā)現(xiàn)miR-375在腫瘤組織中的表達顯著低于癌旁組織,但它是否參與結(jié)直腸癌的調(diào)控及其作用機制尚不清楚。因此,我們首先從多個數(shù)據(jù)庫搜集miR-375的預測靶基因及其作用通路,篩選出JAK2/STAT3、MAP3K8/ERK及ATG7/LCIII信號途徑。然后以結(jié)直腸癌細胞株HT29, HCT116, Caco2為材料,通過基因工程技術(shù)瞬時和穩(wěn)定表達miR-375后,發(fā)現(xiàn)在分子水平上miR-375確實通過下調(diào)靶基因JAK2和MAP3K8,抑制了下游的STAT3和ERK1/2蛋白的磷酸化水平；但miR-375并未通過靶標ATG7/LCIII參與調(diào)控自噬途徑。細胞增殖實驗表明,miR-375在一定程度上抑制了細胞增殖及遷移能力；進一步的個體成瘤實驗發(fā)現(xiàn),注射空載體HCT116細胞的裸鼠在15天形成腫瘤,且腫瘤體積隨時問增大,而注射miR-375穩(wěn)定表達的HCT116細胞的裸鼠在35天均無腫瘤形成。 綜上所述,miR-375在結(jié)直腸癌中表達下調(diào),并且通過JAK2/STAT3和MAP3K8/ERK而非ATG7/LCIII信號途徑參與細胞的增殖和遷移。此結(jié)論為將miR-375作為結(jié)直腸癌的診斷標記及治療的靶標分子,在臨床應用上提供了一定的理論依據(jù)。
【關鍵詞】：結(jié)直腸癌 miR-375 JAK2/STAT3信號途徑 MAP3K8/ERK信號途徑
【學位授予單位】：云南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 縮略詞對照表6-7
• 目錄7-9
• 第一章 前言9-19
• 1.1 結(jié)直腸癌現(xiàn)狀及診斷9-10
• 1.2 STAT3、ERK與結(jié)直腸癌關系10-12
• 1.2.1 STAT3與腫瘤的發(fā)生10-12
• 1.2.2 ERK與腫瘤的發(fā)生12
• 1.3 microRNA研究現(xiàn)狀12-16
• 1.3.1 microRNA形成12-14
• 1.3.2 microRNA作用機制14-15
• 1.3.3 microRNA與腫瘤的關系15
• 1.3.4 microRNA與結(jié)直腸癌診斷15-16
• 1.3.5 miR-375與消化道癌癥16
• 1.4 miR-375作用機制16-19
• 1.4.1 miR-375與靶基因16-17
• 1.4.2 miR-375與JAK2/STAT3、MAPK/ERK通路17-19
• 1.5 研究的目的及意義19
• 第二章 . 材料與方法19-37
• 2.1 實驗材料19-22
• 2.1.1 過表達質(zhì)粒19-20
• 2.1.2 細胞株20
• 2.1.3 主要試劑耗材20-21
• 2.1.4 主要儀器21-22
• 2.2 實驗方法22-37
• 2.2.1 miR-375瞬時過表達載體構(gòu)建22-30
• 2.2.2 構(gòu)建miR-375穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株30-32
• 2.2.3 Western Blot檢測miR-375調(diào)控的蛋白變化32-35
• 2.2.4 miR-375對細胞增殖及遷移的影響35-36
• 2.2.5 劃痕實驗檢測miR-375對細胞遷移增殖能力的影響36-37
• 2.2.6 裸鼠成瘤實驗37
• 第三章 . 結(jié)果與分析37-51
• 3.1 miR-375靶標基因分析結(jié)果37-38
• 3.2 pRNAT-CMV3.2/puro-miR375載體的構(gòu)建38-40
• 3.2.1 HEK293T細胞基因組DNA提取38
• 3.2.2 梯度PCR擴增目的條帶38-39
• 3.2.3 菌落PCR檢測片段連接39
• 3.2.4 測序結(jié)果39-40
• 3.3 pRNAT-CMV3.2/puro-miR375瞬時轉(zhuǎn)染結(jié)果40-41
• 3.4 miR-375穩(wěn)定高表達細胞株構(gòu)建及檢測41-44
• 3.5 Western Blot檢測蛋白水平44-46
• 3.6 MTS法和細胞計數(shù)法檢測細胞增殖46-47
• 3.7 劃痕實驗檢測miR-375對細胞遷移能力的影響47-48
• 3.8 裸鼠成瘤實驗48-51
• 第四章 . 討論51-53
• 第五章 . 結(jié)論53-55
• 5.1 hsa-miR-375過表達載體及穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的構(gòu)建53
• 5.2 miR-375對JAK2/STAT3信號通路的抑制53
• 5.3 miR-375對MAPK/ERK信號通路的抑制53
• 5.4 miR-375對細胞增殖能力的影響53-54
• 5.5 miR375對細胞遷移增殖能力的影響54
• 5.6 miR375抑制裸鼠的腫瘤形成54-55
• 附錄一相關試劑配制方法55-56
• 附錄二56-58
• 參考文獻58-62
• 致謝62

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 韓競春;黃磊;張開立;陳曉燕;孔慶友;孫媛;吳茉莉;李宏;;NF-κB和Stat3信號途徑在胃癌組織和細胞系中的活化[J];臨床軍醫(yī)雜志;2008年02期

2 胡楊柳;陳莉;李衛(wèi)平;;腔內(nèi)超聲聯(lián)合血清癌胚抗原檢測對直腸癌分期的診斷[J];南昌大學學報(醫(yī)學版);2012年12期

3 袁敏;沈南;唐元家;;B細胞分化成熟的microRNA研究進展[J];現(xiàn)代免疫學;2009年02期

4 吳一波;余星;郭俊明;;微RNA-375的抑癌機制[J];中國生物化學與分子生物學報;2012年03期

5 趙君;王亞東;王貴齊;丁璐;劉茉;楊文珍;梁萬年;;結(jié)直腸癌篩查方案的應用與優(yōu)化[J];中國全科醫(yī)學;2014年30期

6 李娟;張小燕;郜恒駿;;microRNA與結(jié)直腸癌關系的研究進展[J];胃腸病學;2010年09期

7 曹鍇;狄建彬;魏文祥;龐智;;miRNA在結(jié)腸癌早期診斷和篩選中的作用[J];世界華人消化雜志;2009年35期

8 ;Detection of point mutation in K-ras oncogene at codon 12 in pancreatic diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2004年06期

9 顏俊偉;廖家智;林菊生;何星星;;miR-375在消化系腫瘤中的研究進展[J];世界華人消化雜志;2014年05期

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本文編號：744253