本文關(guān)鍵詞：TET2對(duì)慢性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

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【摘要】：目的:研究TET2對(duì)慢性髓細(xì)胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。方法:(1)使用密度梯度離心法分離CML患者和健康供體的骨髓單個(gè)核細(xì)胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNCs),采用基因組PCR擴(kuò)增直接測(cè)序方法(PCR amplification and directly sequencing)擴(kuò)增TET2基因第3-11號(hào)外顯子,將PCR產(chǎn)物進(jìn)行Sanger測(cè)序。檢測(cè)慢性髓細(xì)胞白血病慢性期(chronic phase,CP)和急變期(blastic crisis,BC)患者TET2基因突變情況。(2)使用CD34+細(xì)胞免疫磁珠富集試劑盒分離純化骨髓CD34+細(xì)胞,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法檢測(cè)CML-CP患者及健康供體BMMNCs及CD34+細(xì)胞中TET2的mRNA表達(dá)水平;(3)利用磷酸鈣沉淀法制備慢病毒,以慢病毒為載體攜帶針對(duì)TET2的RNAi轉(zhuǎn)導(dǎo)至K562細(xì)胞中,采用qRT-PCR,Western blot,Dot blot方法驗(yàn)證TET2的打靶效率;(4)采用細(xì)胞生長(zhǎng)計(jì)數(shù)、集落生成實(shí)驗(yàn),比較TET2沉默K562細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞的增殖、集落生成能力的差異;(5)使用不同濃度伊馬替尼(Imatinib mesylate,IM)處理TET2沉默K562細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞,研究TET2沉默是否影響K562細(xì)胞對(duì)IM的敏感性。結(jié)果:1.所檢測(cè)的20例CML-CP及26例CML-BC患者,其基因組DNA均未檢測(cè)到TET2編碼區(qū)外顯子突變。2.TET2基因的mRNA表達(dá)在CML-CP患者BMMNCs及CD34+細(xì)胞中均較健康供體來(lái)源細(xì)胞顯著降低(P0.05)。3.使用慢病毒遞送含shNC(包含一段無(wú)義的對(duì)照shRNA核苷酸系列)(對(duì)照組)、shT1(實(shí)驗(yàn)組1)和shT2(實(shí)驗(yàn)組2)(均包含特異性沉默TET2的shRNA系列)質(zhì)粒至K562細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞TET2的mRNA和蛋白表達(dá)抑制率均50%,基因組羥甲基化水平顯著下降。對(duì)照組細(xì)胞無(wú)變化。4.TET2沉默K562細(xì)胞的增殖及集落生成能力較對(duì)照組細(xì)胞顯著增強(qiáng)(P0.05)。5.TET2沉默K562細(xì)胞對(duì)IM的敏感性較對(duì)照組細(xì)胞顯著降低(P0.05)。結(jié)論:1.本研究未檢測(cè)到CML-CP及CML-BC患者TET2基因突變。2.CML-CP患者BMMNCs及CD34+細(xì)胞中TET2基因表達(dá)水平均較正常人明顯降低。3.運(yùn)用慢病毒載體干擾技術(shù)成功沉默K562細(xì)胞中TET2基因的表達(dá)。4.沉默TET2基因表達(dá)能促進(jìn)K562細(xì)胞在體外的增殖和集落形成。5.沉默TET2降低了K562細(xì)胞對(duì)IM的敏感性。
【關(guān)鍵詞】：TET2 慢性髓細(xì)胞白血病 CD34~+ K562 伊馬替尼
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R733.72
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 材料和方法11-23
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-29
• 討論29-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 綜述:miR-22對(duì)TET2調(diào)控的研究進(jìn)展38-49
• 參考文獻(xiàn)43-49
• 中英文縮略詞匯表49-51
• 攻讀碩士學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文51-52
• 致謝52-54

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本文編號(hào)：700275