本文關(guān)鍵詞：RACK1對肝細(xì)胞基本功能以及肝細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的影響

  更多相關(guān)文章： RACK1 條件性基因敲除 活性氧簇 TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡

【摘要】：背景:支架蛋白RACK1(Receptor for activated C kinase 1,活化的C激酶受體1),是WD重復(fù)序列家族成員,由7個Trp-Asp(WD40)高度保守的序列組成,分子量約為36KD,因與G蛋白β2亞基同源也被稱為GNB2L1(Guanine nucleotide-binding protein subunit beta-2-like 1,鳥苷酸結(jié)合蛋白亞基beta2樣)。RACK1可以依靠其表面形成的豐富的蛋白-大分子相互作用表位與多種胞漿蛋白及細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)結(jié)合,參與多條胞內(nèi)信號通路以及細(xì)胞生命活動的調(diào)節(jié)。多項研究表明,RACK1在肝細(xì)胞癌中存在高表達(dá),通過不同機(jī)制促進(jìn)肝細(xì)胞癌發(fā)展。然而RACK1在正常肝組織中發(fā)揮怎樣的作用卻尚屬未知。本研究主要利用RACK1在肝細(xì)胞內(nèi)條件性基因敲除小鼠,對RACK1在正常肝細(xì)胞中發(fā)揮怎樣的作用進(jìn)行研究;進(jìn)一步對RACK1在氧化應(yīng)激相關(guān)的肝損傷動物模型以及細(xì)胞模型中發(fā)揮的作用進(jìn)行探討。目的:探討RACK1在肝細(xì)胞內(nèi)缺失對小鼠存活率的影響;探討RACK1在肝細(xì)胞內(nèi)缺失對肝功能及肝組織代謝的影響;探討RACK1在肝細(xì)胞內(nèi)缺失對肝細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的影響;探討RACK1在肝癌細(xì)胞應(yīng)對氧化應(yīng)激損傷中的作用和機(jī)制。方法:我們利用課題組已經(jīng)建立的RACK1肝細(xì)胞內(nèi)特異性敲除小鼠模型進(jìn)行相關(guān)課題的研究�；蛐蜑镽ACK1 loxp+/+,Alb+/-的稱為KO小鼠;相應(yīng)的,基因型為RACK1 loxp+/+,Alb-/-的小鼠為對照小鼠(WT),對同窩同性別的WT和KO小鼠進(jìn)行體重檢測、鼠尾血的采集,探討了RACK1在肝實質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的缺失對小鼠生存率及肝功能的影響;通過對小鼠肝組織的免疫組化檢測及油紅O檢測,探討了RACK1在肝細(xì)胞增殖及代謝中的作用;利用肝臟缺血再灌注的病理模型,觀察RACK1在肝細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用;利用原代肝細(xì)胞分離方法從體外方面驗證了RACK1在肝細(xì)胞中對TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的作用;課題組其他成員利用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜鑒定的方法發(fā)現(xiàn)了RACK1潛在結(jié)合蛋白氧化還原酶CBR1,我們利用免疫共沉淀的方法驗其相互作用;利用流式檢測方法驗證了RACK1與CBR1在肝細(xì)胞系細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用,并對機(jī)制進(jìn)行探討。結(jié)果:通過對WT和KO小鼠中的多項平行實驗的觀察,未發(fā)現(xiàn)RACK1缺失對小鼠的生存率及體重有顯著性影響;發(fā)現(xiàn)RACK1缺失能夠造成一定程度的肝細(xì)胞本底增殖,發(fā)現(xiàn)RACK1缺失導(dǎo)致脂肪堆積并一定程度的加重肝缺血再灌注損傷。在分離的WT和KO小鼠的原代肝細(xì)胞中,發(fā)現(xiàn)RACK1的缺失顯著增強(qiáng)了TNF-α和CHX誘導(dǎo)的肝細(xì)胞死亡。在肝癌細(xì)胞系中,發(fā)現(xiàn)敲低RACK1會促進(jìn)細(xì)胞ROS(Reactive Oxygen Species,活性氧簇)產(chǎn)生,發(fā)現(xiàn)RACK1能夠促進(jìn)CBR1表達(dá)上調(diào),進(jìn)而發(fā)現(xiàn)RACK1能夠通過CBR1抑制肝癌細(xì)胞ROS產(chǎn)生。結(jié)論:RACK1在正常肝細(xì)胞中的缺失對肝組織代謝造成一定影響并一定程度的增加肝缺血再灌注損傷;在肝癌細(xì)胞系中,RACK1通過CBR1抑制ROS產(chǎn)生,拮抗TNF-α和過氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。
【關(guān)鍵詞】：RACK1 條件性基因敲除 活性氧簇 TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 縮略詞表8-13
• 前言13-15
• 第一章 RACK1基因在肝細(xì)胞內(nèi)的缺失對小鼠生長發(fā)育的影響15-29
• 第一節(jié) RACK1在肝細(xì)胞內(nèi)特異性缺失對小鼠生長發(fā)育及肝功能影響17-21
• 1 材料和方法17-18
• 1.1 實驗動物17
• 1.2 主要的材料和儀器17
• 1.3 小鼠出生率統(tǒng)計17
• 1.4 不同周齡KO、WT小鼠體重統(tǒng)計17
• 1.5 鼠尾靜脈采血17-18
• 1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析18
• 2 結(jié)果18-21
• 2.1 RACK1在肝細(xì)胞內(nèi)特異性缺失對小鼠出生率的影響18
• 2.2 RACK1在肝細(xì)胞內(nèi)特異性缺失對小鼠體重的影響18-20
• 2.3 RACK1在肝細(xì)胞內(nèi)特異性缺失對小鼠肝功能的影響20-21
• 第二節(jié) RACK1在肝細(xì)胞內(nèi)特異性缺失對肝細(xì)胞增殖及代謝的影響21-27
• 1 材料和方法21-23
• 1.1 實驗動物21
• 1.2 主要試劑21
• 1.3 主要儀器設(shè)備21
• 1.4 小鼠肝組織的摘取及組織切片的制備21
• 1.5 小鼠肝組織的免疫組化21-23
• 1.6 油紅O染色23
• 2 結(jié)果23-25
• 2.1 RACK1在肝細(xì)胞內(nèi)特異性缺失對肝組織表型的影響23-24
• 2.2 RACK1基因在肝細(xì)胞內(nèi)特異性缺失對肝細(xì)胞增殖的影響24
• 2.3 RACK1基因在肝實質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的缺失對肝組織內(nèi)的脂肪代謝影響24-25
• 3 討論25-27
• 本章小結(jié)27-29
• 第二章 RACK1在肝細(xì)胞內(nèi)的缺失對肝細(xì)胞應(yīng)對氧化應(yīng)激的影響29-43
• 第一節(jié) RACK1在肝細(xì)胞內(nèi)的缺失對小鼠肝組織缺血再灌注的影響31-35
• 1 材料和方法31-32
• 1.1 實驗動物31
• 1.2 主要的材料和儀器31
• 1.3 主要試劑31
• 1.4 小鼠肝缺血再灌注模型建立31-32
• 1.5 小鼠轉(zhuǎn)氨酶檢測32
• 1.6 TUNEL免疫組化32
• 2 結(jié)果32-35
• 2.1 小鼠肝缺血再灌注后RACK1對轉(zhuǎn)氨酶的影響32-34
• 2.2 RACK1在肝細(xì)胞內(nèi)的特異性缺失對IR術(shù)后肝細(xì)胞凋亡的影響34-35
• 第二節(jié) RACK1對由TNF-Α 誘導(dǎo)的小鼠肝細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響35-41
• 1 材料和方法35-37
• 1.1 實驗動物35
• 1.2 細(xì)胞株35
• 1.3 主要試劑35-36
• 1.4 主要的儀器設(shè)備36
• 1.5 主要試劑配制36
• 1.6 小鼠肝實質(zhì)細(xì)胞分離方法36-37
• 1.7 Hoechst染色37
• 1.8 慢病毒感染細(xì)胞后凋亡檢測37
• 2 結(jié)果37-39
• 2.1 RACK1對由TNF-α加CHX所誘導(dǎo)的小鼠原代肝細(xì)胞的凋亡的影響37-38
• 2.2 RACK1基因在BNLCL.2 細(xì)胞內(nèi)敲低后對TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡檢測38-39
• 3 討論39-41
• 本章小結(jié)41-43
• 第三章 RACK1通過抑制ROS產(chǎn)生，拮抗氧化應(yīng)激損傷43-55
• 1 材料和方法43-46
• 1.1 細(xì)胞株43
• 1.2 主要試劑43
• 1.3 主要儀器設(shè)備43-44
• 1.4 常用試劑配備44
• 1.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染44
• 1.6 蛋白內(nèi)源性結(jié)合檢測44-45
• 1.7 ROS測定45
• 1.8 蛋白免疫印跡45-46
• 1.9 細(xì)胞凋亡的流式檢測46
• 2 結(jié)果46-52
• 2.1 肝癌細(xì)胞內(nèi)敲低RACK1對細(xì)胞凋亡的影響46-47
• 2.2 肝癌細(xì)胞內(nèi)敲低RACK1基因?qū)OS的影響47-48
• 2.3 肝癌細(xì)胞內(nèi)敲低CBR1對細(xì)胞凋亡的影響48-50
• 2.4 RACK1與CBR1存在相互作用50
• 2.5 細(xì)胞的RACK1蛋白與CBR1蛋白表達(dá)量的相關(guān)性檢測50-51
• 2.6 CBR1 在肝癌細(xì)胞20#敲低克隆中對凋亡的逆轉(zhuǎn)51-52
• 3 討論52-53
• 本章小結(jié)53-55
• 全文總結(jié)55-57
• 參考文獻(xiàn)57-59
• 綜述59-67
• 參考文獻(xiàn)65-67
• 攻讀學(xué)位期間所投出的文章及參加的會議67-68
• 致謝68-69

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 仲偉鑒,印木泉,浦躍樸;煤煙致大鼠肺細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的機(jī)制探討[J];勞動醫(yī)學(xué);2000年03期

2 葛圣蕾;;自由基氧化應(yīng)激損傷在老齡化神經(jīng)變性疾病中的作用[J];國外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊);2002年06期

3 王云;常志文;;硫氧還蛋白-1:一個新的疾病氧化應(yīng)激損傷標(biāo)志物[J];心臟雜志;2011年03期

4 丁銀慧;孫競;錢元霞;李蕓子;高靜;陳峗;;晚期糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷及線粒體功能紊亂[J];江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年03期

5 劉朝巍;張濤;楊卓;;氧化應(yīng)激損傷線粒體參與癲癇病理過程[J];中國病理生理雜志;2008年01期

6 谷峰;董振南;賈興旺;王玲;田亞平;;抗震救災(zāi)醫(yī)療隊員與受災(zāi)人員氧化應(yīng)激損傷指標(biāo)的比較研究[J];標(biāo)記免疫分析與臨床;2010年06期

7 陳文豪;陳浩;趙達(dá)君;喬慧蓮;易定華;;番茄紅素對血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的作用及機(jī)制研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年11期

8 黎涌;招偉賢;;圍術(shù)期氧化應(yīng)激損傷及跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究進(jìn)展[J];國際麻醉學(xué)與復(fù)蘇雜志;2006年04期

9 張春霞;胡利民;康立源;劉利萍;郭虹;;腦缺血氧化應(yīng)激損傷及中藥拮抗作用研究進(jìn)展[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2007年12期

10 張德迎;魏光輝;何大維;劉星;林濤;李旭良;;葉下珠植物提取物保護(hù)鹽酸氮芥對小鼠睪丸組織的氧化應(yīng)激損傷[J];生殖與避孕;2008年12期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 顏建英;;子癇前期與氧化應(yīng)激損傷[A];中華醫(yī)學(xué)會第三次全國妊娠期高血壓疾病學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

2 王詠波;王茜;于振乾;杜建玲;;窖蛋白-1在波動性高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用及機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

3 呂萍萍;范瑩;陳瑩瑩;朱立;沈岳良;;環(huán)加氧酶2抑制劑對抗心肌氧化應(yīng)激損傷中的作用及機(jī)制[A];浙江省生理科學(xué)會2006年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

4 胡凱騫;張龍澤;陳春英;孫寶云;邢更妹;趙保路;趙宇亮;聶廣軍;;功能化富勒烯衍生物效應(yīng)探索:延長線蟲壽命和保護(hù)氧化應(yīng)激損傷的分子機(jī)理研究[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會暨第九屆全國會員代表大會摘要集[C];2009年

5 韓婧;李學(xué)軍;;姜黃素通過誘導(dǎo)人內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生自噬抗氧化應(yīng)激損傷[A];全國第十二屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

6 方朝暉;鮑陶陶;章小平;;2型糖尿病中醫(yī)辨證與氧化應(yīng)激損傷相關(guān)性的研究[A];第九次全國中醫(yī)糖尿病學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2006年

7 張銘;陳懷生;楊大春;曾智;余敏;;同型半胱氨酸對血管內(nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷及對IL-8分泌的影響[A];全國第九屆心臟學(xué)會第十二屆心功能學(xué)會《心臟雜志》編委會聯(lián)合學(xué)術(shù)會議論文集[C];2005年

8 王艷霞;劉儀;張偉;韓東寧;張源淑;;血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)對大鼠腎氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制[A];中國生理學(xué)會消化內(nèi)分泌生殖代謝生理專業(yè)委員會2011年消化內(nèi)分泌生殖學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2011年

9 張婷;王凡;朱俊東;易龍;付鈺潔;糜漫天;;染料木黃酮對人血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用[A];重慶市營養(yǎng)學(xué)會學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

10 齊華林;王俊;江薇;嚴(yán)海東;;瘦素在誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會資料匯編[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 張中橋;復(fù)方丹參注射液對EPC氧化應(yīng)激損傷有保護(hù)作用[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

2 記者 衣曉峰;我國首設(shè)中醫(yī)神志病學(xué)博士后科研工作站[N];中國中醫(yī)藥報;2014年

3 張中橋;復(fù)方丹參注射液對內(nèi)皮前體細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷有保護(hù)作用[N];中國醫(yī)藥報;2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孔寧;下調(diào)miR-100對RGC-5的作用及相關(guān)機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

2 賈濟(jì);神經(jīng)元還原穩(wěn)態(tài)減輕氧化應(yīng)激損傷的新機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 劉靜;氧化應(yīng)激損傷在赭曲霉毒素A誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯中的作用及其可能機(jī)制的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

4 易龍;黃酮類植物化學(xué)物抑制內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的結(jié)構(gòu)—效應(yīng)關(guān)系研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

5 張立超;抗氧化劑在梗阻性黃疸大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)氧化應(yīng)激損傷中的應(yīng)用研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 符曉華;含二氟亞甲基異黃酮類化合物的合成及抗血管內(nèi)皮氧化應(yīng)激損傷活性測定[D];中南大學(xué);2006年

7 葉俊生;左卡尼汀在腎小管上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的保護(hù)作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

8 張昱;PJ-34對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其抗氧化應(yīng)激損傷的機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2011年

9 陸志明;高游離脂肪酸誘導(dǎo)血管局部氧化應(yīng)激損傷的分子機(jī)制及中藥干預(yù)研究[D];四川大學(xué);2006年

10 王瑞敏;低劑量Genistein誘導(dǎo)eNOS/Nrf2-ARE通路對缺血后神經(jīng)元氧化應(yīng)激損傷和空間學(xué)習(xí)記憶缺陷的保護(hù)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周浩;Exendin-4減輕脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的機(jī)制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

2 李貞;枸杞多糖對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張亞卓;小麥低聚肽對體外氧化應(yīng)激損傷腸上皮細(xì)胞保護(hù)作用及其機(jī)制的探討[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 宋少練;芍藥苷對晚期氧化蛋白產(chǎn)物誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的干預(yù)作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王曉燕;干擾小分子蛋白Sulfiredoxin-1對大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷影響的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

6 周思蕾;RACK1對肝細(xì)胞基本功能以及肝細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的影響[D];河南大學(xué);2015年

7 王莉;7-二氟亞甲基-5，，4’-二甲烷氧基異黃酮對過氧化氫誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用研究[D];南華大學(xué);2006年

8 鄒玉凌;綠原酸對氧化應(yīng)激損傷人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞保護(hù)作用的分子機(jī)制[D];南昌大學(xué);2014年

9 鄭媛媛;Nrf2在大鼠HSC氧化應(yīng)激損傷中的作用及機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

10 李玉亮;川芎及其有效成分對照射所致機(jī)體氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

本文編號：688223