本文關(guān)鍵詞：NOB1在食管癌中的表達及其對食管癌細胞增殖和耐藥的影響

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【摘要】：食管癌是世界高發(fā)的惡性腫瘤之一。其起病隱匿,進展迅速的特征,使多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已為晚期,預(yù)后差。食管癌患者的預(yù)后和早期診斷有著密切關(guān)系,但由于缺乏有效的早期診斷手段,大部分患者首診時已為進展期,其五年生存率在15%~25%之間。隨著轉(zhuǎn)化醫(yī)學的發(fā)展,尋找特異性腫瘤標記物是早期診斷的關(guān)鍵,為手術(shù)根治提供機會。分子靶向治療是繼手術(shù)治療、放療、化療之后腫瘤患者的又一選擇,也為食管癌合理化、個體化的診治提供了新的研究方向。因此,有必要深入探索有應(yīng)用價值的食管癌分子標志物和靶分子,從而為提高食管癌的早診率和發(fā)展個體化治療奠定實驗基礎(chǔ)。NOB1編碼蛋白,含有一個PIN結(jié)構(gòu)域及一個鋅帶蛋白結(jié)構(gòu)域,其通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄途徑,在細胞周期、腫瘤發(fā)生及進展、多藥耐藥等生物過程中扮演重要角色。近期部分研究者的RT-PCR相關(guān)實驗結(jié)果顯示,NOB1在人體的食管、肺、肝、脾、結(jié)腸、腎等多種組織中均都有不同程度的表達,其中,已有研究發(fā)現(xiàn),NOB1可能與乳腺癌、白血病、結(jié)腸癌、肝癌、甲狀腺腺癌、宮頸癌、卵巢癌、膠質(zhì)瘤等疾病的發(fā)生相關(guān)。本研究擬為檢測NOB1在食管鱗狀細胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表達情況,并觀察其在不同分期、分級的食管癌組織中的表達水平,探討NOB1蛋白對食管癌細胞生長和耐藥性的調(diào)控作用,從而分析NOB1在食管癌中發(fā)生、發(fā)展的作用,進而探討NOB1蛋白在早期診斷食管癌及治療中的作用,旨在為探索新的基因診療方法奠定基礎(chǔ)�！灸康摹�1.觀察NOB1在食管鱗狀細胞癌中的表達情況,進而分析其表達水平與臨床病理特征的相關(guān)性;2.隨訪術(shù)后患者,分析NOB1的表達與患者預(yù)后的關(guān)系;3.測定食管癌細胞系及食管正常上皮細胞系中NOB1蛋白的表達水平;4.觀察NOB1 m RNA在食管癌細胞系中的表達情況;5.構(gòu)建低表達NOB1的食管癌細胞系;6.探討NOB1蛋白對食管癌細胞生長的調(diào)控作用;7.探討NOB1蛋白對食管癌細胞耐藥性的調(diào)控作用�！痉椒ā�1.收集我院食管癌術(shù)后標本,制作癌組織、癌旁組織病理切片;2.利用免疫組織化SP法檢測NOB1在食管鱗狀細胞癌組織、癌旁組織中的表達情況;3.在電子病歷系統(tǒng)中建立術(shù)后患者隨訪表,電話追蹤患者術(shù)后情況;4.應(yīng)用免疫印跡法測定食管癌細胞系及食管正常上皮細胞系中NOB1蛋白的表達水平;5.應(yīng)用熒光實時定量PCR測定NOB1 m RNA在食管癌細胞系中表達情況;6.利用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建低表達NOB1的食管癌細胞系;7.利用MTT實驗和平板克隆形成實驗探討NOB1對食管癌細胞生長的調(diào)控作用;8.利用MTT實驗、流式細胞儀技術(shù)和Annexin/PI染色法研究NOB1對食管癌細胞耐藥性的調(diào)控作用;9.用Student’s t檢驗、Pearsonχ2檢驗或者Fisher’s精確檢驗分析NOB1在食管鱗狀細胞癌的表達與患者年齡、性別、腫瘤分級、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等的相關(guān)性;10.相關(guān)數(shù)據(jù)用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計與分析,生存分析用Kaplan-Meier生存曲線、log-rank檢驗進行統(tǒng)計,預(yù)后分析用COX回歸模型進行統(tǒng)計,其中,P0.05認定為差異有統(tǒng)計學意義�！窘Y(jié)果】1.164例食管鱗狀細胞癌的癌組織中,NOB1蛋白在細胞質(zhì)中彌漫表達;2.免疫組化結(jié)果顯示,在164例食管癌組織中,NOB1在49例(29.9%)呈強陽性表達(++),在52例(31.7%)呈陽性表達(+),在63例(38.4%)呈陰性表達(-)。NOB1蛋白在101例(61.5%)食管癌組織中的表達高于癌旁組織。3.在8例食管癌患者新鮮的癌組織與癌旁組織中,運用PCR的方法檢測到NOB1m RNA的表達,發(fā)現(xiàn)NOB1在癌組織里面高表達(0.9±0.023),而在癌旁組織中呈低表達(0.3±0.004)。4.NOB1的表達水平與腫瘤的大小、分化程度有關(guān),與年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無關(guān)。5.發(fā)現(xiàn)NOB1強陽性表達患者的生存期明顯較低表達者短(P=0.016),預(yù)后更差;統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明,隨著NOB1表達強度的增加,食管癌患者的預(yù)后變得越來越差。6.Western-blot結(jié)果顯示:與正常食管上皮HEEC相比,NOB1蛋白在食管癌細胞系EC109和EC9706中高表達。7.實時定量PCR結(jié)果顯示:NOB1 m RNA在食管癌細胞系中高表達,其表達水平與western-blot的結(jié)果趨勢基本上保持一致。8.通過慢病毒轉(zhuǎn)染抑制了NOB1在食管癌細胞中的表達,發(fā)現(xiàn)下調(diào)NOB1可以顯著抑制食管癌細胞EC9706的增殖能力。9.下調(diào)NOB1可以顯著抑制食管癌細胞EC9706的耐藥性。【結(jié)論】1.NOB1在食管鱗狀細胞癌中的表達明顯升高,其表達水平與食管癌的分化程度密切相關(guān);NOB1的表達越強,患者的預(yù)后越差;2.下調(diào)NOB1可以顯著抑制食管癌細胞的增殖能力和耐藥性;3.NOB1是一個有應(yīng)用價值的食管鱗狀細胞癌的預(yù)后相關(guān)分子,還是一個潛在的基因治療靶點。
【關(guān)鍵詞】：食管癌 NOB1 免疫組化 RT-PCR Western-blot 耐藥
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 文獻回顧15-29
• 1.NOB1 的結(jié)構(gòu)與功能15-19
• 2.NOB1 與腫瘤19-22
• 3.NOB1 與食管鱗狀細胞癌的分子靶向治療進展22-24
• 4. NOB1 與食管癌的多藥耐藥研究現(xiàn)狀24-29
• 第一部分 NOB1在食管鱗狀細胞癌中的表達及其臨床意義29-38
• 引言29
• 1 實驗材料29-30
• 2 實驗方法30-33
• 3 實驗結(jié)果33-37
• 4 討論37-38
• 第二部分 NOB1在食管癌細胞系中的表達及其對腫瘤細胞增殖的影響38-50
• 引言38
• 1 實驗材料38-39
• 2 實驗方法39-44
• 3 實驗結(jié)果44-48
• 4 討論48-50
• 第三部分 NOB1對食管癌細胞多藥耐藥的調(diào)節(jié)作用50-56
• 引言50
• 1 實驗材料50-51
• 2 實驗方法51-53
• 3 實驗結(jié)果53-55
• 4 討論55-56
• 小結(jié)56-57
• 參考文獻57-68
• 附錄68-70
• 個人簡歷和研究成果70-72
• 致謝72

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Expressions of Thymidylate Synthase, Thymidine Phosphorylase, Class Ⅲ β-tubulin, and Excision Repair Cross-complementing Group 1 Predict Response in Advanced Gastric Cancer Patients Receiving Capecitabine Plus Paclitaxel or Cisplatin[J];Chinese Journal of Cancer Research;2011年04期

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本文編號：678543