本文關(guān)鍵詞：AMPK對胃上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化及胃癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的抑制作用

  更多相關(guān)文章： TGF-β metformin AMPK 上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT) 侵襲轉(zhuǎn)移 胃癌

【摘要】：背景和目的:癌癥細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤向惡性方向變化的重要標志。大部分癌癥患者死亡并非死于原發(fā)性癌而是轉(zhuǎn)移性癌。因此,本課題利用胃癌細胞模型,深入探討癌癥的侵襲和轉(zhuǎn)移機制,對胃癌的治療和預后具有重要的意義。上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是胚胎發(fā)育過程中的基本現(xiàn)象。它不僅參與胚胎形成與發(fā)育,同時在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中起著至關(guān)重要的作用,TGF-β信號是EMT的主要誘導因子之一。AMPK(單磷酸腺苷活化激酶,AMP-activited Protein Kinase)是細胞內(nèi)能量感受器,調(diào)控生物體內(nèi)能量平衡。目前關(guān)于AMPK對TGF-β誘導的EMT及腫瘤侵襲遷移調(diào)節(jié)的的系統(tǒng)性研究尚未見報道。因此,本課題旨在研究AMPK對TGF-β誘導的上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)及細胞侵襲遷移的調(diào)節(jié)作用。研究方法:1.胃癌組織中AMPK活性與EMT相關(guān)指標的表達:以免疫組化技術(shù)對不同臨床分期的胃癌標本中的AMPK活性與EMT指標的表達進行相關(guān)性分析。同時從醫(yī)院組織標本庫冷凍保存(-86℃)的標本中,選取16例標本,以免疫印跡技術(shù)檢測AMPK活性和EMT指標,分析兩者的相關(guān)性。2.胃來源細胞株中AMPK活性與EMT相關(guān)指標的表達:以免疫印跡技術(shù)在胃來源細胞株中檢測AMPK活性和EMT指標的表達。以劃痕實驗檢測細胞的遷移能力。3.TGF-β誘導EMT的發(fā)生:以免疫印跡技術(shù)檢測在TGF-β作用SGC-7901和MKN-28細胞不同時間后EMT相關(guān)蛋白的表達,以劃痕實驗來觀察細胞形態(tài)變化和細胞遷移能力。4.AMPK抑制TGF-β誘導的EMT:以免疫印跡技術(shù)檢測二甲雙胍在作用細胞不同時間后AMPK磷酸化蛋白表達。以免疫印跡技術(shù)檢測二甲雙胍與TGF-β聯(lián)合作用細胞后EMT相關(guān)蛋白表達,以進一步證明AMPK的激活是否能抑制EMT的發(fā)生。以劃痕實驗、Transwell實驗檢測細胞的侵襲遷移能力來觀察AMPK對細胞生物行為學的影響。結(jié)果:1.胃癌組織中AMPK活性與EMT相關(guān)指標的表達:在不同臨床分期的胃癌標本中p-AMPK,E-cadherin隨著分期的上升而表達下降,P-smad2,Vimentin,N-cadherind隨著分期的上升而表達增加。其中p-AMPK與P-smad2,Vimentin,N-cadherin的表達負相關(guān),與E-cadherin的表達正相關(guān)。在16例標本中P-smad2,Vimentin,N-cadherin的表達均高于癌旁組織,而p-AMPK,E-cadherin的表達卻在癌旁組織中高于胃癌組織。提示在胃黏膜癌變過程中p-AMPK對EMT起調(diào)節(jié)作用。2.胃來源細胞株中AMPK活性與EMT相關(guān)指標的表達:胃癌細胞株(MKN28,SGC-7901,823)中Vimentin,N-cadherin表達均低,可以篩選為誘導EMT的細胞。3.TGF-β誘導EMT的發(fā)生:隨著TGF-β作用時間延長,細胞逐漸形成梭形,間充質(zhì)化表型逐漸顯現(xiàn);SGC-7901和MKN-28細胞中間充質(zhì)特性蛋白Vimentin,N-cadherin,β-catenin表達逐漸增強,上皮特性蛋白E-cadheirn表達降低。4.AMPK抑制TGF-β誘導的EMT:p-AMPK,p-ACC的表達隨metformin處理時間的延長而逐漸增加;Metformin與TGF-β聯(lián)合處理細胞后,EMT間充質(zhì)性蛋白表達較TGF-β組明顯降低;劃痕實驗中TGF-β誘導后細胞遷移距離較長,而metformin+TGF-β聯(lián)合處理后,細胞遷移距離明顯減短。Transwell實驗中TGF-β誘導之后侵襲細胞數(shù)增多,而metformin+TGF-β聯(lián)合處理后,侵襲的細胞數(shù)明顯降低;結(jié)論:1.胃癌臨床標本中的AMPK活性下降伴有EMT指標的上升,并且與胃癌轉(zhuǎn)移程度密切相關(guān);提示EMT指標的上升與AMPK活性有關(guān);2.AMPK被活化后,EMT表型將顯著下降,細胞實驗證明了AMPK能抑制細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移;
【關(guān)鍵詞】：TGF-β metformin AMPK 上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT) 侵襲轉(zhuǎn)移 胃癌
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮略詞對照表10-12
• 第1章 引言12-16
• 第2章 材料與方法16-33
• 2.1 材料16-20
• 2.1.1 實驗材料16
• 2.1.2. 主要試劑16-19
• 2.1.3 主要儀器19
• 2.1.4 日常消耗物品19-20
• 2.1.5 藥品20
• 2.2 方法20-32
• 2.2.1 主要溶液的配置20-24
• 2.2.2 實驗方法24-32
• 2.3 統(tǒng)計學處理32-33
• 2.3.1 免疫組化結(jié)果分析32
• 2.3.2 統(tǒng)計學分析32
• 2.3.3 倫理32-33
• 第3章 胃癌組織中AMPK活性和EMT相關(guān)指標的表達33-38
• 3.1 實驗目的33
• 3.2 實驗結(jié)果33-38
• 3.2.1. 病理資料整理33-34
• 3.2.2. 在胃癌不同分期中的各指標的表達34-35
• 3.2.3. 在胃癌中AMPK活性與EMT相關(guān)指標的關(guān)系35-36
• 3.2.4. 人胃癌和癌旁組織中AMPK，EMT相關(guān)指標的表達36-38
• 第4章 胃來源細胞株中p-AMPK和EMT相關(guān)指標的表達以及細胞遷移能力的檢測38-41
• 4.1 實驗目的38
• 4.2 實驗結(jié)果38-41
• 4.2.1. 胃細胞中p-AMPK和EMT指標的表達38-40
• 4.2.2. 胃來源細胞的遷移能力40-41
• 第5章 TGF-β誘導胃癌細胞中上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生41-46
• 5.1 實驗目的41-42
• 5.2 實驗結(jié)果42-46
• 5.2.1. TGF-β誘導EMT間充質(zhì)特性蛋白表達呈時間依賴性42-45
• 5.2.2. TGF-β誘導成EMT后對細胞的遷移能力的影響45-46
• 第6章 AMPK抑制胃癌細胞中EMT的發(fā)生46-51
• 6.1 實驗目的46
• 6.2 實驗結(jié)果46-51
• 6.2.1. metformin激活AMPK呈時間依賴性46-47
• 6.2.2. AMPK激活劑metformin抑制上EMT的發(fā)生47-49
• 6.2.3. AMPK抑制胃癌細胞的遷移49
• 6.2.4. AMPK抑制胃癌細胞的侵襲49-51
• 第7章 討論51-55
• 7.1 臨床標本中AMPK和EMT的關(guān)系51-52
• 7.2 胃來源細胞株p-AMPK和EMT相關(guān)指標檢測以及細胞遷移能力的檢測52
• 7.3 TGF-β對EMT的誘導作用52-53
• 7.4 AMPK抑制胃癌細胞的EMT53-55
• 第8章 結(jié)論與展望55-56
• 8.1 結(jié)論55
• 8.2 展望55-56
• 致謝56-57
• 參考文獻57-60
• 附錄60-66
• 攻讀學位期間的研究成果66-67
• 綜述 AMPK異常表達與在胃癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究進展67-76
• 參考文獻 (References)72-76

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