本文關(guān)鍵詞：Connexin43過表達對U251細胞生長遷移及凋亡作用的研究

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【摘要】：縫隙連接是相鄰細胞間的直接連接，細胞質(zhì)可以通過縫隙連接通道直接聯(lián)系在一起。縫隙連接直接調(diào)解代謝產(chǎn)物、離子從一個細胞運輸?shù)搅硪粋�細胞內(nèi)�？p隙連接蛋白43（Connexin43，Cx43）在中樞神經(jīng)系統(tǒng)星型膠質(zhì)細胞中高表達，而最常見的星形細胞瘤中的表達常常是降低的。有研究認為Cx43表達的降低將會有利于膠質(zhì)瘤細胞的生長。本研究在建立膠質(zhì)瘤U251過表達Cx43基礎(chǔ)上，通過細胞增殖實驗，細胞遷移實驗（Migration assay），，RT-PCR（Reversetranscription，PCR）和Western Blot等實驗方法，分析Cx43對膠質(zhì)瘤U251在生長，遷移和凋亡方面的作用和影響。為膠質(zhì)瘤的治療及耐藥機制的研究提供新的思路和方法。 1．Cx43對細胞生長的影響 U251和Cx43過表達U251細胞分別計數(shù)，10%FBS+IMDM培養(yǎng)基種植到24孔板，培養(yǎng)7天，每隔24h消化細胞，取均值進行細胞計數(shù)。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，U251和Cx43-U251細胞在4-5天時生長迅速，在6-7天時細胞生長趨于平緩。兩種細胞在1-4天時生長差別不大，在5-7天時U251細胞增殖遠大于Cx43-U251細胞具顯著差異。 實驗結(jié)果表明，過表達Cx43對U251細胞增殖具有一定的影響。Cx43對U251細胞生長的抑制作用有可能與細胞周期調(diào)解蛋白相關(guān)。 2. Cx43對細胞遷移的影響 本部分實驗擬檢測Cx43對膠質(zhì)瘤細胞遷移能力的影響。劃痕實驗顯示，Cx43過表達U251細胞在修復(fù)劃痕過程中細胞的運動性更有方向性（指向性），正常U251細胞在劃痕修復(fù)時間和細胞運動性上與Cx43過表達U251具有顯著差別。觀察發(fā)現(xiàn)，Cx43過表達U251細胞劃痕處遷移過程中細胞自身形態(tài)發(fā)生改變。與U251細胞相比，Cx43過表達U251細胞骨架更為伸展，由多角形變?yōu)楠M長的梭形。 實驗結(jié)果表明，Cx43過表達可以促使細胞更快修復(fù)劃痕，增強了細胞遷移能力。腦膠質(zhì)瘤的浸潤性生長是臨床治療難點，Cx43有可能是通過與細胞骨架蛋白之間相互作用來影響細胞遷移。 3. Cx43對細胞凋亡的影響 目前對膠質(zhì)瘤的治療多采用手術(shù)、放化療綜合治療方案。TMZ因為具良好療效而被廣泛使用。實驗證明1000uM TMZ誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤發(fā)生凋亡。為進一步闡述Cx43是否參與TMZ誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤凋亡，采用U251和Cx43過表達U251細胞組，檢測了Cx43，Caspase-3，Bcl-2和Bax的表達水平。實驗結(jié)果顯示: Cx43過表達組U251Bax/Bcl-2比值遠低于U251組比值，具統(tǒng)計學(xué)差異（p0.05）。Cx43過表達U251細胞中Bcl-2表達增多，Bax表達降低，Bax/Bcl-2比率顯著降低；Cx43過表達U251細胞中Caspase-3表達明顯降低。結(jié)果表明，Cx43可能是通過線粒體通路影響細胞凋亡。 綜上所述，Cx43具有可抑制U251細胞的增殖，促進細胞遷移，抵抗由TMZ誘導(dǎo)細胞凋亡的作用。
【關(guān)鍵詞】：縫隙連接蛋白43 膠質(zhì)瘤 遷移 凋亡
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文詞表8-11
• 第1章 文獻回顧11-28
• 1.1 中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的形成星形細胞瘤11-12
• 1.2 縫隙連接蛋白家族12-17
• 1.2.1 縫隙連接（GJIC，Gap junction intercellular communiction）12-13
• 1.2.2 縫隙連接蛋白的基因結(jié)構(gòu)13-17
• 1.3 Cx43 的生物學(xué)特性17-27
• 1.3.1 Cx43(GJA1)17-18
• 1.3.2 Cx43 結(jié)構(gòu)特點18-19
• 1.3.3 Cx43 在人膠質(zhì)瘤細胞中的表達19
• 1.3.4 Cx43 在腫瘤發(fā)生中的作用機制19
• 1.3.5 Cx43 對細胞生長的作用19-22
• 1.3.6 Cx43 對細胞遷移作用22-25
• 1.3.7 Cx43 對凋亡的作用25-27
• 1.4 本課題研究目的和內(nèi)容27-28
• 1.4.1 研究目的27
• 1.4.2 具體內(nèi)容27-28
• 第2章 材料與方法28-39
• 2.1 實驗細胞28
• 2.2 實驗試劑28-29
• 2.3 實驗儀器29-30
• 2.4 試劑配置30-31
• 2.5 實驗方法31-39
• 2.5.1 細胞培養(yǎng)及穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系構(gòu)建31-32
• 2.5.2 Cx43 對 U251 細胞增殖的影響32
• 2.5.3 Cx43 過表達對 U251 細胞遷移及細胞形態(tài)學(xué)的影響32-33
• 2.5.4 檢測替莫唑胺 Cx43 過表達 U251 細胞凋亡作用的研究33-38
• 2.5.5 TUNEL 檢測凋亡38
• 2.5.6 統(tǒng)計學(xué)分析38-39
• 第3章 實驗結(jié)果39-49
• 3.1 Cx43 過表達對 U251 細胞增殖的影響39-41
• 3.2 Cx43 過表達對 U251 細胞遷移能力的影響41-42
• 3.3 Cx43 過表達 U251 細胞在替莫唑胺誘導(dǎo)的凋亡機制中產(chǎn)生的影響42-49
• 3.3.1 MTS 檢測細胞增殖42-44
• 3.3.2 RT-PCR 檢測 U251 及過表達 Cx43 U251 細胞 mRNA 表達情況44-46
• 3.3.3 Western Blot 檢測 Cx43 過表達 U251 細胞凋亡相關(guān)蛋白表達情況46-48
• 3.3.4 TUNEL 檢測凋亡48-49
• 第4章 討論49-52
• 第5章 結(jié)論52-53
• 參考文獻53-64
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果64-65
• 致謝65

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;Epilepsy and Brain Tumors[J];中國神經(jīng)腫瘤雜志;2009年04期

2 戴宜武;神經(jīng)干細胞發(fā)育過程中分化、遷移調(diào)控機制研究現(xiàn)狀[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2003年02期

3 李學(xué)東;程馥艷;傅華群;;縫隙連接蛋白的非通訊功能[J];國外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊);2007年04期

4 晏浩;胡火利;徐建軍;;縫隙連接蛋白43與急性心肌缺血[J];國外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊);2009年03期

5 夏杰;難治性癲癇與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[J];國外醫(yī)學(xué).神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)分冊;2004年01期

6 張忠;;膠質(zhì)瘤與癲癇[J];中國神經(jīng)腫瘤雜志;2012年03期

7 周紅;許文;陳小娥;;瘢痕疙瘩同位素治療方法的臨床研究[J];東南國防醫(yī)藥;2013年04期

8 崔永奇;耿沁;顧愛琴;朱淼鑫;孔韓衛(wèi);孫磊;劉蕾;閆明霞;姚明;;肺腺癌骨轉(zhuǎn)移裸小鼠模型的建立及MicroCT觀察[J];中國肺癌雜志;2013年09期

9 李海明;;動態(tài)增強MRI在卵巢腫瘤中的研究進展[J];放射學(xué)實踐;2013年09期

10 Patrick-Denis St-Coeur;Mohamed Touaibia;Miroslava Cuperlovic-Culf;Pier Jr Morin;;Leveraging Metabolomics to Assess the Next Generation of Temozolomide-based Therapeutic Approaches for Glioblastomas[J];Genomics, Proteomics & Bioinformatics;2013年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 Xuejun Jiang;Zunzhen Zhang;;Sodium arsenite and arsenic trioxide differently affect the oxidative stress,genotoxicity and apoptosis in A549 cells:an implication for the paradoxical mechanism[A];第十一屆全國博士生學(xué)術(shù)年會（生物醫(yī)藥專題）論文集（下冊，墻報P25-P48）[C];2013年

2 張貝貝;何春曉;宋正波;婁廣媛;余新民;趙s

本文編號：647209