發(fā)布時(shí)間：2017-08-09 15:37

  本文關(guān)鍵詞：食管鱗癌放射抗拒細(xì)胞株蛋白指紋圖譜特征的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的:探討食管鱗狀細(xì)胞癌(ECa109)放射抗拒細(xì)胞株特征性蛋白指紋圖譜,為進(jìn)一步開展臨床研究提供依據(jù)。方法:1.確定食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株ECa109的亞致死劑量射線。2.構(gòu)建食管鱗狀細(xì)胞癌放射抗拒細(xì)胞株模型。食管鱗狀細(xì)胞癌放射抗拒細(xì)胞株ECa109-IR是用亞致死劑量放射線反復(fù)照射法獲得的,ECa109-IR來源于食管鱗癌細(xì)胞株ECa109,是ECa109接受5次亞致死劑量射線后存活的第五代亞克隆細(xì)胞。3.檢測食管鱗癌放射抗拒細(xì)胞株ECa109-IR的放射敏感性�？寺∩嬖囼�(yàn)、細(xì)胞增殖試驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)比較ECa109-IR和ECa109的放射敏感性。4.測差異蛋白譜——用蛋白指紋圖譜技術(shù)檢測放射抗拒細(xì)胞株ECa109-IR與放射敏感細(xì)胞株ECa109之間差異的蛋白譜。結(jié)果:1、建立食管鱗狀細(xì)胞癌放射抗拒細(xì)胞株ECa109-IR。ECa109-IR為ECa109接受亞致死劑量射線反復(fù)5次照射后,存活的第五代亞克隆細(xì)胞株為放射抗拒細(xì)胞株ECa109-IR。2、ECa109-IR細(xì)胞的放射抗拒性分析。a.克隆生存實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ECa109-IR的存活克隆比ECa109的更大、數(shù)量更多,表現(xiàn)為放射抗拒。ECa109-IR的劑量存活曲線下降趨勢比ECa109慢。從而證實(shí)ECa109-IR的放射抗拒性明顯高于ECa109,ECa109-IR的放射抗拒性強(qiáng)。b.細(xì)胞增值實(shí)驗(yàn)射線對放射抗拒細(xì)胞株ECa109-IR的生長影響效應(yīng)較小,射線照射后細(xì)胞恢復(fù)時(shí)間短、增長快。c.流式細(xì)胞術(shù)G0/G1的百分率:ECa109-IR和ECa109無明顯差異,S期的百分率:ECa109-IR比ECa109高,G2/M期的百分率:ECa109-IR比ECa109低,表明ECa109-IR細(xì)胞放射誘導(dǎo)的G1/S和G2/M期阻滯的作用在明顯弱于ECa109,這與典型的放射抗拒表型一致。該實(shí)驗(yàn)表明,放射誘導(dǎo)的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)在放射抗拒細(xì)胞株ECa109-IR發(fā)生了改變。3.ECa109-IR和ECa109蛋白指紋圖譜:ECa109-IR細(xì)胞和ECa109細(xì)胞的蛋白質(zhì)荷比峰存在明顯差異(P0.05的差異峰為21個(gè),P0.01的差異峰為19個(gè)),差異峰的M/Z幾乎均在6000以內(nèi),其中以M/Z在2000-6000最多見。以上顯示ECa109-IR細(xì)胞和ECa109細(xì)胞蛋白圖譜存在差異,即兩者之間存在差異蛋白,這些蛋白極有可能為決定ECa109-IR和ECa109放射敏感性差異的原因。結(jié)論:放射抗拒ECa109-IR細(xì)胞和放射敏感ECa109細(xì)胞之間存在差異蛋白質(zhì)荷比峰,也是ECa109-IR放射抗拒的原因,并為臨床研究提供依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：食管鱗癌 放射治療 放療抵抗 蛋白指紋圖譜技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 引言8-11
• 實(shí)驗(yàn)材料11-13
• 實(shí)驗(yàn)方法13-15
• 1.ECa109細(xì)胞株的復(fù)蘇13
• 2.細(xì)胞培養(yǎng)傳代13-14
• 3.細(xì)胞的凍存14
• 4.活細(xì)胞計(jì)數(shù)14
• 5.蛋白質(zhì)的提取14-15
• 實(shí)驗(yàn)步驟15-17
• 1.培養(yǎng)ECa109細(xì)胞15
• 2.建立ECa109-IR細(xì)胞株15
• 3、克隆生存實(shí)驗(yàn)探討ECa109-IR的放射抗拒性15-16
• 4、細(xì)胞增值實(shí)驗(yàn)分析ECa109-IR細(xì)胞的放射抗拒性16
• 5、流式細(xì)胞術(shù)檢測ECa109-IR的放射抗拒性16-17
• 6、ECa109-IR細(xì)胞和ECa109細(xì)胞蛋白指紋圖譜測定17
• 結(jié)果17-23
• 1.放射抗拒ECa109細(xì)胞株的建立17
• 2.ECa109-IR細(xì)胞的放射抗拒性分析17-20
• 3.ECa109-IR細(xì)胞蛋白指紋圖譜20-23
• 討論23-25
• 小結(jié)25
• 參考文獻(xiàn)25-29
• 致謝29-30
• 附錄A 個(gè)人簡歷及發(fā)表文章30-40
• 附錄B 綜述40-52
• 參考文獻(xiàn)48-52

【相似文獻(xiàn)】

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1 蘇芳;朱小東;曲頌;黎丹戎;張瑋;梁世雄;李文莊;;人鼻咽癌放射抗拒細(xì)胞株建立及其細(xì)胞周期的觀察[J];中華腫瘤防治雜志;2009年16期

2 鄧滌;周福祥;周云峰;熊杰;謝從華;;人喉鱗癌放射抗拒細(xì)胞株與其親本細(xì)胞增殖和侵襲能力的比較[J];醫(yī)學(xué)新知雜志;2007年04期

3 陳鑫;車少敏;惠蓓娜;張曉智;;食管鱗癌放射抗拒的相關(guān)microRNA篩選[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年03期

4 蘇穎;吳君心;何火聰;林可q4;鄒長h，

本文編號：646055