本文關鍵詞：hDOT1L基因在急性白血病發(fā)病機制中的作用及其臨床意義

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【摘要】：目的:白血病的發(fā)生和發(fā)展與表觀遺傳修飾異常密切相關,是細胞遺傳和表觀遺傳共同改變的結果。研究證實,白血病細胞周期調節(jié)異常、增殖失控與細胞周期蛋白異常表達或缺失有關,而凋亡受抑與促凋亡基因過甲基化和抗凋亡基因低甲基化息息相關。研究人員發(fā)現(xiàn)人類DOT1酶(h DOT1L)是一類新的組蛋白賴氨酸甲基轉移酶,通過誘導組蛋白H3K79高甲基化活化急性髓系白血病(AML)中起關鍵作用的一套基因促使白血病的發(fā)生。本研究通過比較初治白血病患者和緩解后患者及復發(fā)患者骨髓單個核細胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNC)中h DOT1L基因及其相關分子的表達和H3K79組蛋白的甲基化水平,并檢測PI3K/AKT信號通路中關鍵分子的表達變化分析兩者之間的關系,探討h DOT1L在白血病發(fā)病機制中的作用和臨床意義,并分析其可能的作用機制,以期揭示白血病治療的新靶點,為白血病的新藥研發(fā)及預后判斷提供可靠的實驗依據。標本采集:收集和提取健康志愿者、急性髓系白血病(AML)患者、急性淋巴細胞白血病(ALL)患者、AML及ALL復發(fā)患者(AL-relapse)及緩解者(AL-CR)的BMMNC,骨髓標本均來自于2013年-2014年河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院血液科住院患者共82例。其中,AML組20例,ALL組20例,AL-relapse組22例(AML復發(fā)12例,ALL復發(fā)10例),AL-CR組共20例(其中AML-CR 10例,ALL-CR 10例),正常對照組健康志愿者20例。實驗組82例患者中,男45例,女37例,年齡17-78歲,中位年齡47.5歲,對照組共20例,男8例,女12例,年齡23-68歲,中位年齡45.5歲。所有患者均經過MICM即細胞形態(tài)學(Morphology,M)、免疫學(Immunology,I)、細胞遺傳學(Cytogenetics,C)和分子生物學(Molecular,M)診斷,符合2008年WHO急性白血病診斷標準。緩解患者均經標準方案一個療程化療達完全緩解。所有骨髓標本提取單個核細胞,并于-80℃冰箱凍存。方法:1 Realtime-PCR(RT-PCR)檢測各組BMMNC內h DOT1L、HOXA9、HOXA10、MLL-AF10(MLLT10)的m RNA表達水平。2 Western Blot法檢測各組h DOT1L蛋白的表達及H3K79甲基化水平。3 Western Blot法檢測各組PI3K、AKT、CDK4及Cyclin D1蛋白的表達水平。4分析細胞周期與h DOT1L及PI3K/AKT信號通路的相關性,探討h DOT1L信號通路與PI3K/AKT信號通路之間的內在聯(lián)系。5統(tǒng)計學分析數據。結果:1 h DOT1L、HOXA9、HOXA10、MLL-AF10基因的m RNA表達水平。RT-PCR結果顯示,所有患者BMMNC中h DOT1L、HOXA9、HOXA10、MLL-AF10基因在m RNA水平均有表達,AML組、ALL組及AL-relapse組BMMNC中上述基因m RNA水平明顯高于正常對照組和AL-CR,且差異顯著(P0.01);AML組、ALL組及AL-ralapse組組間比較及AL-CR組與正常對照組比較均無明顯差異(P0.05)。2 h DOT1L的蛋白的表達及H3K79甲基化水平Western Blot檢測結果表明,AML組和ALL組及AL復發(fā)組BMMNC中h DOT1L和H3K79-me2(雙甲基)蛋白表達水平顯著高于正常對照組和AL緩解組,并有統(tǒng)計學意義(P0.01);AML組和ALL組及AL復發(fā)組之間比較及AL緩解組與正常對照組比較上述蛋白表達水平均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。3 PI3K、AKT、CDK4、Cyclin D1蛋白的表達水平Western Blot檢測結果提示,AML組、ALL組及AL-relapse組患者BMMNC中PI3K、AKT蛋白表達水平較正常對照組和AL-CR組明顯升高(P0.01);CDK4、Cyclin D1蛋白在AML組、ALL組和AL-relapse組表達水平顯著高于正常對照組和AL-CR組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。AML組、ALL組和AL-relapse之間比較及AL-CR組與正常對照組比較上述蛋白表達水平均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。結論:1 h DOT1L是一種新型的組蛋白賴氨酸甲基轉移酶,它通過提高H3K79的甲基化水平并誘導其下游HOXA9、HOXA10、MLL-AF10基因的表達參與了急性白血病的發(fā)病機制,并與疾病的預后息息相關;阻斷此通路可能是治療白血病的一個新思路。2 PI3K/AKT信號通路在白血病發(fā)病及預后中發(fā)揮著重要作用,該通路中與細胞增殖、凋亡和細胞周期分布相關的四種關鍵分子PI3K、AKT、CDK4、Cyclin D1與h DOT1L信號通路之間的HOXA9、HOXA10、MLL-AF10基因的表達變化一致,提示它們之間可能存在一定聯(lián)系,但其內在的相關性還需要進一步深入研究。
【關鍵詞】：H3K79 hDOT1L基因 甲基化 急性白血病 DNA
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-22
• 結果22-24
• 附圖24-26
• 附表26-28
• 討論28-30
• 結論30-31
• 參考文獻31-34
• 綜述 惡性血液病與DNA甲基化34-44
• 參考文獻40-44
• 致謝44-45
• 個人簡歷45

【參考文獻】

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1 杜婷婷;黃秋花;;組蛋白賴氨酸甲基化在表觀遺傳調控中的作用[J];遺傳;2007年04期

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本文編號：632413