本文關(guān)鍵詞：FoxM1基因在人類Burkitt淋巴瘤細胞株Raji中的功能研究

  更多相關(guān)文章： FoxM1 Burkitt淋巴瘤 Raji Thiostrepton(TST) TST 多柔比星 FoxM1 藥物敏感性

【摘要】：目的：FoxM1屬于Forkhead Box轉(zhuǎn)錄因子家族,參與調(diào)節(jié)正常細胞增殖和凋亡等多種重要病理生理過程,其在多種實體腫瘤存在異常高表達。近年來FoxM1在血液系統(tǒng)腫瘤中的作用被日漸關(guān)注,本文旨在研究FoxM1基因在人類Burkitt淋巴瘤細胞株Raji中的表達水平,探索其在B細胞淋巴瘤(B-NHL)疾病增殖和凋亡中的作用。方法：采用實時定量PCR (qRT-PCR)方法檢測正常人外周血CD19+的B淋巴細胞(正常對照,NC)和Raji細胞的mRNA水平,蛋白質(zhì)印記法(Western-blot)檢測蛋白水平的表達。硫鏈絲菌素(TST)是FoxM1的特異性抑制劑,是一種具有抗生素性質(zhì)的天然產(chǎn)物,用TST處理Raji細胞后,通過細胞增殖-毒性檢測試劑盒(CCK-8)進行加入不同藥物濃度TST后的細胞活性抑制率檢測,24及36 h后加入CCK8 20 μl,測得各孔OD值,計算出TST對Raji細胞24 h及36h的半抑制濃度(IC50)；再用此濃度處理Raji細胞后,采用流式細胞術(shù)(FCM) Annexin/PI雙染法檢測用TST處理及未處理NC的凋亡率,同時在mRNA及蛋白水平驗證FoxM1的表達變化。結(jié)果：FoxM1在mRNA和蛋白水平的表達都顯著高于正常對照(p0.05和p0.001),使用特異性抑制劑TST后明顯抑制Raji細胞增殖并且凋亡率顯著增加,進一步分析發(fā)現(xiàn)TST對Raji的作用呈劑量及時間依賴性,隨著劑量及時間的增加凋亡率呈現(xiàn)上升趨勢,測得24 h的半抑制濃度為5.39 pmol/L,同時在mRNA及蛋白水平檢測FoxM1具有統(tǒng)計學(xué)差異,即FoxM1顯著下調(diào)(p0.001和p0.05)。結(jié)論：FoxM1在人類Burkitt淋巴瘤細胞株Raji中呈現(xiàn)mRNA和蛋白水平高表達,特異性抑制FoxM1表達可以抑制Raji增殖并促進凋亡,表明FoxM1在Raji細胞增殖和凋亡中發(fā)揮重要作用。目的：研究FoxMl特異性抑制劑thiostrepton (TST)在增加Raji細胞株對多柔比星藥物敏感性中的作用。方法：利用CCK8和流式細胞術(shù)分別檢測TST和多柔比星對于Raji細胞株增殖和凋亡的影響,摸索兩種藥物作用的濃度梯度,進一步利用兩者低濃度聯(lián)合處理Raji細胞株,觀察是否存在協(xié)同效應(yīng)。結(jié)果：經(jīng)過分析發(fā)現(xiàn)TST和多柔比星對于Raji細胞株增殖和凋亡的影響都呈現(xiàn)時間和劑量依賴性。TST對Raji細胞作用的IC50為5.39μmol/L,當濃度為3μmol/L時細胞抑制率及凋亡率降低,Raji細胞平均凋亡率為10.82%；單用多柔比星0.08 μmol/L和0.03 μmol/L作用Raji細胞24 h后凋亡率分別為23.52%和9.32%,故認為低濃度的TST (3 μmol/L)和多柔比星(0.03 μmol/L)細胞毒性較弱；首先聯(lián)用3 μmol/L的TST后多柔比星的IC50值從0.08 μmol/L降至0.04μmol/L;進一步聯(lián)合低濃度TST和多柔比星作用Raji細胞株24 h后的平均凋亡率為21.41%,凋亡率較兩者單藥顯著增加(p0.05)。結(jié)論：FoxM1特異性抑制劑TST和多柔比星均可以抑制Raji細胞增殖和促進凋亡,并且呈現(xiàn)時間和劑量依賴性,兩者在較低濃度聯(lián)合使用可以產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng),顯著提高Raji細胞株對多柔比星的敏感性,促進細胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：FoxM1 Burkitt淋巴瘤 Raji Thiostrepton(TST) TST 多柔比星 FoxM1 藥物敏感性
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733
【目錄】：

• 第一部分 FoxM1基因?qū)aji細胞株增殖和凋亡的作用5-37
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-13
• 材料與方法13-24
• 結(jié)果24-30
• 分析與討論30-33
• 參考文獻33-37
• 第二部分 FoxM1在Raji細胞株藥物增敏中的作用研究37-53
• 中文摘要37-38
• Abstract38-40
• 前言40-42
• 材料與方法42-44
• 結(jié)果44-48
• 分析與討論48-51
• 參考文獻51-53
• 綜述53-64
• 參考文獻60-64
• 附錄64-66
• 致謝66

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本文編號：629203