發(fā)布時間：2017-08-03 15:09

  本文關鍵詞：MPDZ基因在肺癌中的甲基化和表達分析

  更多相關文章： MPDZ 肺癌 DNA甲基化 基因表達 生存分析 預后因素

【摘要】：背景:肺癌是最常見的嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤,在全世界范圍內肺癌也是主要的死亡原因之一。由于大部分肺癌病人確診時已為腫瘤中晚期,因此肺癌的5年存活率仍然不足15%。越來越多的研究表明,DNA甲基化在腫瘤抑制基因的轉錄沉默調控中具有重要作用。抑癌基因啟動子區(qū)域DNA甲基化改變與肺癌的發(fā)生密切相關。因此,通過尋找肺癌發(fā)生過程中DNA甲基化的變化規(guī)律,將為其早期診斷和改進治療方式提供新的思路。MPDZ基因是我們前期在肺癌組織中新篩選出的一個甲基化基因,但是其在肺癌以及其他腫瘤中的甲基化及其功能還不清楚,因此本課題擬通過對MPDZ基因在肺癌組織、癌旁正常組織以及腫瘤細胞株中的甲基化、表達分析,初步評價其在肺癌發(fā)生中的意義,為后續(xù)深入研究該基因在腫瘤發(fā)生中的作用及機制提供資料。目的:1.分析MPDZ基因在肺癌細胞、癌旁組織和肺癌組織及相應血漿和痰液中的甲基化發(fā)生情況以及甲基化發(fā)生率與患者臨床病理資料的關系;2.分析MPDZ基因在肺癌細胞和肺癌組織中的表達與其甲基化調控之間的關系;3.分析MPDZ基因在肺癌組織的蛋白表達與臨床病理學、患者生存時間的關系。方法:1.采用甲基化特異性PCR(Methylation specific PCR,MSP)和亞硫酸氫鹽修飾測序PCR(Bisulfite sequencing PCR,BSP)相結合的方法檢測肺癌細胞、癌旁組織和肺癌組織及相應血漿和痰液中MPDZ基因的甲基化情況;2.采用逆轉錄-聚合酶鏈反應(Reverse transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)和免疫組織化學(Immunohistochemistry,IHC)染色的方法檢測肺癌細胞、肺癌組織和癌旁組織中MPDZ基因表達情況以及去甲基化藥物5-aza-2′-deoxycytidine(5-aza-d C)處理前后肺癌細胞中MPDZ基因的表達變化情況;3.采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件,通過卡方檢驗分析MPDZ基因的甲基化或表達與患者臨床病理資料之間的相關性,通過Kaplan-Meier和Cox-regression生存分析方法分析mpdz表達與患者生存時間之間的關聯(lián)。結果:1.mpdz基因在70%(7/10)的肺癌細胞株、61.2%(60/98)的肺癌組織、55.6%(70/126)的肺癌患者血漿標本和48.1%(50/104)的肺癌患者痰液標本中發(fā)生了高甲基化,而在正常肺上皮細胞株hbe和20例癌旁正常組織中均沒有發(fā)生甲基化;經(jīng)統(tǒng)計學分析,肺癌細胞和正常細胞以及肺癌組織和癌旁組織間甲基化差異具有顯著統(tǒng)計學意義(p0.01)。2.mpdz基因在62例具有對應的血漿和痰液標本的肺癌組織中43例都檢測出甲基化,甲基化發(fā)生率達到69.4%(43/62),在43例發(fā)生了甲基化的肺癌組織相對應血漿標本中有33例發(fā)生了甲基化,甲基化率為76.7%(33/43);在43例發(fā)生了甲基化的肺癌組織相對應的痰液標本中有20例發(fā)生了甲基化,甲基化率為46.5%(20/43)。提示血漿與痰液標本中mpdz基因甲基化有較高的檢出率,是一個候選的診斷標志物。3.mpdz基因的甲基化發(fā)生率與肺癌患者的臨床分期明顯相關(p=0.047),而與患者的年齡(p=0.156)、性別(p=0.950)、是否吸煙(p=0.455)、腫瘤的分化程度(p=0.445)以及腫瘤病理類型(p=0.100)不相關,且mpdz基因甲基化發(fā)生率在iii+iv期(15/17,88.2%)患者顯著高于i+ii期(28/45,62.2%)患者。4.mpdz蛋白在大部分高甲基化的肺癌細胞和大部分的肺癌組織中呈現(xiàn)低表達或不表達,與該基因在這些細胞和肺癌組織中的高甲基化密切相關,而且肺癌細胞進行去甲基化藥物5-aza-dc處理后mpdz基因的表達明顯得到恢復。這些結果表明,mpdz基因在肺癌中是一個受dna甲基化調控的基因。5.mpdz蛋白表達與肺癌患者的病理分級(χ2=7.250,p=0.027)和臨床分期(χ2=5.773,p=0.016)密切關聯(lián),而與肺癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、淋巴結總數(shù)、淋巴結狀態(tài)和病理分型不相關(p0.05)。6.mpdz蛋白表達與總肺癌(p0.001)、肺腺癌(p0.001)和肺鱗癌(p=0.001)患者的生存期長短均呈正相關,且該蛋白表達是一個獨立的預后因素。mpdz蛋白在臨床tnm分期i+ii期患者及iii+iv期患者中的預后意義存在明顯差異,在i+ii期患者mpdz蛋白表達與患者生存時間正相關,是一個獨立的預后因素,而在iii+iv期患者mpdz蛋白表達與患者生存時間不相關。結論:MPDZ基因在肺癌中是一個受DNA甲基化調控的基因,其在肺癌組織中甲基化發(fā)生率與肺癌患者的臨床分期明顯相關,其表達與肺癌患者的病理分級和臨床分期密切關聯(lián),最重要的是MPDZ蛋白表達與肺癌患者的生存期長短均呈正相關,且該基因的蛋白表達是一個獨立的預后因素。這些結果提示,MPDZ基因在肺癌的發(fā)生過程中可能起著重要作用,且其甲基化或表達可以作為肺癌診斷和預后判定的一個潛在的標志物。
【關鍵詞】：MPDZ 肺癌 DNA甲基化 基因表達 生存分析 預后因素
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 英文縮略詞4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 MPDZ基因在肺癌組織及相應癌旁組織、外周血漿、痰液和肺癌細胞株中的甲基化狀態(tài)分析13-28
• 2.1 材料和方法13-20
• 2.2 實驗結果20-26
• 2.3 討論26-28
• 第三章 MPDZ基因在肺癌中的表達及甲基化對表達的調控分析28-43
• 3.1 材料和方法28-31
• 3.2 實驗結果31-40
• 3.3 討論40-43
• 全文總結43-44
• 參考文獻44-48
• 文獻綜述 DNA甲基化與肺癌研究進展48-58
• 參考文獻52-58
• 學位期間發(fā)表論文58-59
• 致謝59

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;Methylation profile of the promoter CpG islands of 14 “drug-resistance”genes in hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2004年23期

2 沈洪兵,俞順章;我國肺癌流行現(xiàn)狀及其預防對策[J];中國腫瘤;2004年05期

，

本文編號：614952