發(fā)布時(shí)間：2017-07-31 12:31

  本文關(guān)鍵詞：不同鎮(zhèn)痛藥對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響及其機(jī)制的研究

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【摘要】：第一章不同鎮(zhèn)痛藥對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響目的：探討不同鎮(zhèn)痛藥(嗎啡、布洛芬、塞來(lái)昔布、氯胺酮)對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響。方法：人肝癌QGY-7703細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,分別接種于培養(yǎng)板或25cm2培養(yǎng)瓶中。采用隨機(jī)數(shù)字表法,將兩種細(xì)胞分別隨機(jī)分為13組(n=6)：不同濃度布洛芬組(IB,-3組)布洛芬終濃度分別為250 umol/L、500 umol/L、 1000umo1/L;塞來(lái)昔布組(CE1-3組)：塞來(lái)昔布終濃度分別為25umol/L、 50umol/L.100umol/L;嗎啡組(M01_3組)：?jiǎn)岱冉M終濃度分別為0.01umol/L、 10umol/L、1000umol/L；氯胺酮組(KE1-3組)：氯胺酮終濃度分別為100umol/L、 500umol/L、1000umol/L;以及正常對(duì)照組(C組)：加入等容量的RPM-1640培養(yǎng)基。分別于孵育24、48和72h時(shí),采用cck-8法測(cè)定各組細(xì)胞增殖抑制率。于孵育48h后,用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率及其周期情況；采用利用Transwell小室檢測(cè)各組細(xì)胞的侵襲和遷移能力。結(jié)果：與C組比較,IB1-3組、CE1-3組、MO1-3組和KE1-3組等十二組細(xì)胞的增殖抑制率均依次升高,且依照藥物作用的濃度和時(shí)間的增加而依次升高,具有濃度和時(shí)間的依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與C組比較,IB1_3組、CE1_3組、M01-3組和KE1_3組等十二組細(xì)胞遷移和侵襲能力均降低,且依照藥物作用的濃度的增加而依次降低,具有濃度依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與C組比較,IB1-3組、CE1-3組、M01-3組和KE1-3組等十二組細(xì)胞凋亡率均增加,且依照藥物作用的濃度增加而依次增加,具有濃度依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與C組比較,IB,_3組、CE1-3組和MO,-3組等九組細(xì)胞的G1期細(xì)胞百分比均升高,S期和M期細(xì)胞百分比均降低,且依照藥物作用濃度的增加而依次變化,具有濃度依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；KE1-3組細(xì)胞的G1期和S期細(xì)胞百分比均升高,M期細(xì)胞百分比均降低,且依照藥物作用的濃度的增加而依次變化,具有濃度依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論布洛芬、塞來(lái)昔布、嗎啡和氯胺酮均可以抑制人肝癌QGY-7703細(xì)胞的增殖,并可降低肝癌QGY-7703細(xì)胞的侵襲和遷移的能力,可能與其促進(jìn)細(xì)胞的凋亡并使細(xì)胞周期發(fā)生阻滯有關(guān)。第二章 布洛芬抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制研究目的：探討PI3K/Akt/mTOR通路和IKKβ/IκBα/NF-κB通路在布洛芬抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)中的作用。方法：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人肝癌細(xì)胞QGY-7703,采用隨機(jī)分為兩組,對(duì)照組(C組)：加入等容量的RPM-1640培養(yǎng)基；實(shí)驗(yàn)組(IB組)：按照不同布洛芬作用濃度分為三個(gè)亞組：IB1組(布洛芬作用濃度為250umol/L), IB2組(布洛芬作用濃度為500umol/L)、IB3組(布洛芬作用濃度為1000umol/L)。各組分別作用48后,采用Real-TimePCR測(cè)各組細(xì)胞中IKKβ、Bcl-2、PI3K、 PTEN和MMP-9基因表達(dá)的變化。用Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞中PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路和IKKβ/IκBα/NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果：1. PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路相關(guān)因子與C組比較,IB1組、IB2組、IB3組三組細(xì)胞PTEN mRNA和PTEN蛋白表達(dá)明顯升高,且隨著布洛芬作用濃度的增加依此升高,具有濃度依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；與C組比較,IB1組、IB2組、IB3組三組細(xì)胞PI3K mRNA、Akt蛋白和mTOR蛋白的表達(dá)量均無(wú)明顯差異(P0.05)；與C組比較,IB1組、IB2組、IB3組等三組細(xì)胞MMP-9 mRNA和MMP-9蛋白的表達(dá)以及p-Akt、p-mTOR蛋白的表達(dá)均顯著下降,且隨著布洛芬作用濃度的增加依此降低,具有良好的濃度依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2. IKKβ/IκBα/NF-κB信號(hào)通路相關(guān)相關(guān)因子表達(dá)的結(jié)果與C組比較,IB1組、IB2組、IB3組三組細(xì)胞IKKβ mRNA和Bcl-2mRNA表達(dá)明顯下調(diào),且依照布洛芬作用濃度的增加而依次下調(diào),具有濃度依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；與C組比較,IB1組、IB2組、IB3組三組細(xì)胞IKKβ、Bcl-2、p-IKKβ、p-IκBα和NF-κ Bp65蛋白的表達(dá)明顯下調(diào),且隨著布洛芬作用濃度的增加依此降低,具有良好的濃度依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：布洛芬對(duì)QGY-7703細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制可能與其對(duì)細(xì)胞PI3K/Akt/mTOR和IKKβ/IκBα/NF-κB信號(hào)通路的調(diào)控有關(guān)。第三章鎮(zhèn)痛藥物處理后肝癌QGY-7703細(xì)胞差異表達(dá)基因的篩選目的：探究鎮(zhèn)痛藥(塞來(lái)昔布、嗎啡和氯胺酮)抑制肝癌QGY-7703細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制方法：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,采用隨機(jī)數(shù)字表法,將細(xì)胞隨機(jī)分為4組(n=3):QGY-7703細(xì)胞分為：塞來(lái)昔布組(CE組)：塞來(lái)昔布作用濃度為50umol/L;嗎啡組(MO組)：?jiǎn)岱茸饔脻舛葹?0 umol/L;氯胺酮組(KE組)：氯胺酮作用濃度為500umol/L;對(duì)照組(C組)加入等容量的RPM-1640培養(yǎng)基。各組培養(yǎng)48h后,采用全基因組表達(dá)譜芯片,篩查鎮(zhèn)痛藥物(塞來(lái)昔布、氯胺酮和嗎啡)處理后QGY-7703細(xì)胞差異表達(dá)基因,并進(jìn)行生物信息學(xué)功能和通路分析。結(jié)果：與C組相比,在CE組細(xì)胞中有141個(gè)基因表達(dá)增加,50個(gè)基因表達(dá)下降；而在KE組中有1032個(gè)基因表達(dá)增加,899個(gè)基因表達(dá)下降；而在MO組中有766個(gè)基因表達(dá)上升,311個(gè)基因表達(dá)下降。其中KE組和CE組兩組共同調(diào)控基因有34個(gè)；KE組和MO組兩組共同調(diào)控基因195個(gè)；MO組和CE組兩組共同調(diào)控18基因個(gè)；KE組、CE組和MO組三組共同調(diào)控基因17個(gè)。生物學(xué)通路分析顯示：與C組相比,CE組差異基因主要涉及應(yīng)急、細(xì)胞的負(fù)性調(diào)節(jié)、生物大分子代謝等方面,參與PPAR信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、mTOR信號(hào)通路等的改變；KE組差異基因主要涉及細(xì)胞周期、RNA的代謝等方面,參與溶酶體、基因的剪接與復(fù)制相關(guān)通路和P53信號(hào)通路等通路的改變；MO組差異基因主要涉及生物代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)、RNA的代謝等方面,參與抗原的加工和提呈、自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性等相關(guān)通路、MAPK信號(hào)通路等通路的改變結(jié)論：本研究成功篩選出鎮(zhèn)痛藥(塞來(lái)昔布、嗎啡和氯胺酮)處理后人肝癌QGY-7703細(xì)胞差異表達(dá)的基因,生物信息學(xué)功能和通路分析顯示鎮(zhèn)痛藥抑制QGY-7703細(xì)胞的生長(zhǎng)涉及了不同的基因和通路,為探討鎮(zhèn)痛藥抗肝癌的作用提供了有效線索并具有一定的指導(dǎo)意義。
【關(guān)鍵詞】：嗎啡 塞來(lái)昔布 布洛芬 氯胺酮 肝癌細(xì)胞 增殖 凋亡 布洛芬 肝癌細(xì)胞PI3K/Akt/mTOR通路 IKKβ/IκBα/NF-κB通路
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R614;R735.7
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-6
• 英文縮略詞表6-9
• 摘要9-15
• ABSTRACT15-21
• 前言21-27
• 參考文獻(xiàn)23-27
• 第一章 不同鎮(zhèn)痛藥對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響27-49
• 材料與方法27-35
• 1 材料27-29
• 2 方法29-35
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-45
• 討論45-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 第二章 布洛芬抑制肝癌QGY-7703細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制研究49-68
• 材料與方法49-60
• 1 材料49-52
• 2 方法52-60
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果60-63
• 討論63-65
• 結(jié)論65
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 第三章 鎮(zhèn)痛藥處理后肝癌QGY-7703細(xì)胞差異表達(dá)基因的篩選68-78
• 材料與方法68-70
• 1 材料68-69
• 2 方法69-70
• 結(jié)果70-74
• 討論74-75
• 結(jié)論75-76
• 參考文獻(xiàn)76-78
• 綜述78-90
• 參考文獻(xiàn)83-90
• 致謝90-91
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文91

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2 張映芳,符雄,秦惠基;鎮(zhèn)痛藥市場(chǎng)現(xiàn)狀及研究進(jìn)展[J];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2002年04期

3 陳豫清;使用鎮(zhèn)痛藥物時(shí)護(hù)士應(yīng)注意的問題[J];中原醫(yī)刊;2003年16期

4 趙雪松;鎮(zhèn)痛藥的發(fā)展動(dòng)態(tài)[J];職大學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2003年02期

5 徐國(guó)柱;鎮(zhèn)痛藥,讓疼痛走開[J];中國(guó)處方藥;2003年07期

6 王文軍,張健;32例截癱病人長(zhǎng)期服用鎮(zhèn)痛藥與不服用鎮(zhèn)痛藥的臨床分析[J];中國(guó)民康醫(yī)學(xué);2004年08期

7 王玉梅;夏玉葉;閔e，

本文編號(hào)：599188