本文關(guān)鍵詞：DAPT抑制具有干細(xì)胞特性的三陰性乳腺癌細(xì)胞系增殖的體內(nèi)外研究

  更多相關(guān)文章： Notch 三陰乳腺癌 HCC38 HCC1806 ALDH1 腫瘤干細(xì)胞 DAPT

【摘要】：目的:驗(yàn)證DAPT對具有干細(xì)胞特性的三陰性乳腺癌細(xì)胞系的抑制作用,并初步探究其作用機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)三陰乳腺癌細(xì)胞株HCC38和HCC1806,通過ALDEFLUOR試劑盒分選出ALDH1陽性的細(xì)胞,按照所給予的藥物不同,將細(xì)胞分成三組:空白對照組(加入生理鹽水)、實(shí)驗(yàn)組(加入不同濃度DAPT)和陽性對照組(加入多西他賽)。1.利用ALDEFLUOR試劑盒,流式分選出ALDH陽性的HCC38細(xì)胞。2.通過微球體實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證HCC38細(xì)胞系中較高的腫瘤干細(xì)胞比例。3.MTT法檢測抑制劑DAPT對處理后HCC38細(xì)胞體外增殖的抑制效應(yīng)。4.應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測DAPT對細(xì)胞凋亡的影響。5.Western blot試驗(yàn)檢測Notch信號通路下游關(guān)鍵蛋白Notch1表達(dá)水平。6.Transwell侵襲試驗(yàn)證明HCC38細(xì)胞的侵襲能力。7.接種HCC38或HCC1806于裸鼠,觀察DAPT對裸鼠體內(nèi)腫瘤的抑制作用結(jié)果:HCC38細(xì)胞在無血清培養(yǎng)下能夠形成微球體(MSs),富含ALDH陽性細(xì)胞。與空白對照組相比,DAPT不僅能顯著殺傷微球體,并且比陽性對照組(多西他賽)作用更明顯。DAPT不僅能夠抑制HCC38細(xì)胞的生長、誘導(dǎo)HCC38細(xì)胞凋亡,還可以降低HCC38細(xì)胞的侵襲力、抑制HCC38細(xì)胞的Notch1蛋白表達(dá),DAPT在裸鼠體內(nèi)的抑瘤作用明顯,能夠有效遏制腫瘤的生長。結(jié)論:Notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的抑制劑DAPT通過抑制Notch下游蛋白Notch1表達(dá),可選擇性的殺傷乳腺癌干細(xì)胞,以此為靶點(diǎn),對治療三陰性乳腺癌提供新的契機(jī)。
【關(guān)鍵詞】：Notch 三陰乳腺癌 HCC38 HCC1806 ALDH1 腫瘤干細(xì)胞 DAPT
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 前言4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-14
• 第1章 緒論14-16
• 第2章 綜述16-23
• 2.1 腫瘤干細(xì)胞假說和克隆進(jìn)化模型17
• 2.2 鑒別腫瘤干細(xì)胞的方法與途徑17-18
• 2.3 乳腺癌干細(xì)胞標(biāo)記物18-20
• 2.4 乳腺癌干細(xì)胞靶向治療20-21
• 2.5 展望21-23
• 第3章 材料與方法23-31
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 3.1.1 細(xì)胞和裸鼠23
• 3.1.2 試劑及耗材23-24
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法24-30
• 3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)24
• 3.2.2 利用ALDEFLUOR試劑盒，，分選出ALDH陽性的HCC38細(xì)胞24-25
• 3.2.3 MTT法檢測DAPT對HCC38細(xì)胞體外增殖的抑制效應(yīng)25-26
• 3.2.4 流式細(xì)胞儀檢測DAPT對細(xì)胞凋亡的影響26-27
• 3.2.5 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的侵襲性27-28
• 3.2.6 無血清懸浮培養(yǎng)人乳腺癌細(xì)胞微球體(mammoshperes)證明HCC38 細(xì)胞的干細(xì)胞特性28-29
• 3.2.7 Western蛋白印跡試驗(yàn)檢測DAPT作用后Notch1蛋白表達(dá)水平29-30
• 3.2.8 觀測DAPT抑制裸鼠體內(nèi)腫瘤的作用30
• 3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析30-31
• 第4章 結(jié)果31-37
• 4.1 DAPT隨時(shí)間及濃度梯度對HCC38細(xì)胞生長的影響31-32
• 4.2 DAPT對人乳腺癌細(xì)胞株HCC38凋亡作用的影響32-33
• 4.3 DAPT對HCC38細(xì)胞株體外細(xì)胞侵襲能力的影響33-34
• 4.4 無血清懸浮培養(yǎng)HCC38細(xì)胞證明其腫瘤干細(xì)胞特性34-35
• 4.5 DAPT對HCC38細(xì)胞NOTCH1蛋白的抑制作用35
• 4.6 DAPT對裸鼠體內(nèi)腫瘤生長的抑制作用35-37
• 第5章 討論37-40
• 5.1 DAPT對乳腺癌作用的研究37
• 5.2 NOTCH信號通路與乳腺癌干細(xì)胞的研究37-38
• 5.3 NOTCH信號通路與乳腺癌干細(xì)胞其他信號通路的研究38-40
• 第6章 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-52
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果52-53
• 致謝53

【參考文獻(xiàn)】

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1 彭功玲;田野;逯

本文編號：587914