本文關(guān)鍵詞：Rac1蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達及其促進膠質(zhì)瘤細胞運動機制的研究

  更多相關(guān)文章： 膠質(zhì)瘤 遷移 侵襲 Rac1 片狀偽足 黏著斑周轉(zhuǎn)

【摘要】：膠質(zhì)母細胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見、侵襲性最強的惡性膠質(zhì)瘤,屬人類難治性和預后極差的腫瘤之一。盡管采用規(guī)范的標準化治療,但膠質(zhì)母細胞瘤患者預后改善甚微。即使腫瘤實現(xiàn)影像學全切,但膠質(zhì)母細胞瘤術(shù)后常常復發(fā)于腫瘤周圍2cm范圍[1-3]。臨床和病理學證據(jù)表明膠質(zhì)瘤細胞常常沿著細長的解剖結(jié)構(gòu)浸潤播散,如腦白質(zhì)纖維束、微血管和無髓鞘軸突[4]。膠質(zhì)母細胞瘤侵襲遷移的特性是其不良預后的主要原因。因此,越來越多的人意識到靶向抑制調(diào)控膠質(zhì)瘤侵襲遷移的分子將為膠質(zhì)瘤的治療提供新方法。膠質(zhì)瘤細胞的遷移侵襲是一個完整和復雜的多步驟過程,其發(fā)生侵襲需要4個基本步驟,包括○1.腫瘤細胞脫離腫瘤實體;○2.與細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的黏附;○3.在基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)等作用下降解ECM;○4.細胞運動和收縮。在這些步驟中,最為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)為細胞的遷移運動。作為重要的信號分子,肌動蛋白骨架及其調(diào)控蛋白在膠質(zhì)瘤細胞的運動中發(fā)揮了重要作用[5,6]。Rac1為Ras相關(guān)的C3肉毒素底物1的簡稱,其基因全長29 kb,包含7個外顯子,位于人染色體7p22,參與Ras基因的惡性轉(zhuǎn)型。Rac1作為Rho家族成員之一,存在Rac1-GDP(失活狀態(tài))和Rac1-GTP(激活狀態(tài))兩種形式,是細胞內(nèi)多條信號轉(zhuǎn)導通路的關(guān)鍵分子。Rac1作為分子開關(guān)參與調(diào)節(jié)一系列的細胞功能,包括細胞增殖、凋亡,腫瘤細胞的侵襲遷移等。片狀偽足的形成和黏著斑的周轉(zhuǎn)作為細胞遷移的兩個關(guān)鍵步驟,在細胞的遷移中發(fā)揮重要作用。Rac1不僅參與細胞片狀偽足的形成,而且參與黏著斑的周轉(zhuǎn)調(diào)節(jié),被認為是調(diào)控腫瘤細胞侵襲遷移的關(guān)鍵因子。相關(guān)研究表明,Rac1在上皮性卵巢癌、胃癌、肝細胞癌等腫瘤中過表達并與腫瘤惡性進展密切相關(guān)[7-9]。本課題主要研究Rac1在膠質(zhì)瘤中的表達及其促進膠質(zhì)瘤細胞運動機制的研究,包括三個部分:1.人膠質(zhì)瘤組織中Rac1的表達。為研究膠質(zhì)瘤中Rac1的表達及其與膠質(zhì)瘤病理分級的相關(guān)性,40例各級別的膠質(zhì)瘤標本以及8例對照腦組織被用于實驗研究。首先,我們運用免疫組化檢測Rac1在不同標本中的表達,結(jié)果證實,rac1在對照腦組織中不表達,而在膠質(zhì)瘤組織標本中其染色強度隨著腫瘤級別的升高而增強(f=105.225,p=0.000)。接下來,蛋白免疫印跡實驗被用于進一步半定量評估rac1在各組織中的表達,結(jié)果為對照腦組織中rac1的表達量為0.093±0.025(n=8),而whoii、whoiii和whoiv級膠質(zhì)瘤標本中rac1表達量分別為0.22±0.031(n=8),0.38±0.031(n=12),0.61±0.025(n=20)。統(tǒng)計學結(jié)果表明,相比于對照腦組織,rac1在膠質(zhì)瘤中表達量升高(p0.01),且與膠質(zhì)瘤的病理分級呈正相關(guān)(r=0.92,p=0.012)。2.rac1在膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲中的作用。我們使用rac1的特異性的小分子抑制劑nsc23766下調(diào)rac1的活性,探討rac1對膠質(zhì)瘤細胞侵襲遷移的影響。u251和snb19細胞系用于體外實驗研究,實驗分為2組,即control組和nsc23766處理組。gstpull-down實驗檢測rac1活性,mtt實驗檢測nsc23766對膠質(zhì)瘤細胞活性的影響;transwell侵襲實驗和劃痕實驗分別用于檢測細胞的侵襲和遷移能力。結(jié)果:rac1的活性被明顯抑制(p0.01),抑制rac1的活性后膠質(zhì)瘤細胞的遷移侵襲能力明顯下降(p0.01)。3.rac1促進膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲的可能機制。為探究rac1促進細胞運動的機制,rac1的小分子抑制劑nsc23766和rac1特異性的小干擾rna兩種方法被用于體外實驗研究。細胞免疫熒光觀察細胞形態(tài)的變化及rac1與limk1在細胞內(nèi)的定位。westernblotting驗證control、sirna-nc和rac1sirna組rac1的表達情況。westernblotting檢測不同處理組p-limk1(thr508)、limk1、mmp-2和mmp-9的表達變化。劃痕實驗和transwell侵襲實驗評價control、rac1sirna和limk1sirna組細胞遷移、侵襲能力的變化。結(jié)果:與control組相比,nsc23766處理組細胞片狀偽足明顯變小甚至不伸展,此外,nsc23766抑制黏著斑的周轉(zhuǎn),抑制limk1的磷酸化(p0.01)。westernblotting結(jié)果顯示,rac1sirna能明顯下調(diào)rac1蛋白的表達。相應地,沉默rac1的表達可得到相似的結(jié)果。免疫熒光結(jié)果顯示rac1與limk1共定位于細胞前緣的片狀偽足處。抑制rac1的活性后mmp-2、mmp-9的表達明顯下調(diào)(p0.01)。與control組相比,rac1sirna與limk1sirna組細胞遷移和侵襲能力明顯下降(p0.01)。結(jié)論:1.與對照腦組織相比,Rac1在膠質(zhì)瘤組織中的表達明顯升高,且與膠質(zhì)瘤病理級別呈正相關(guān)。2.Rac1在膠質(zhì)瘤細胞的侵襲和遷移中發(fā)揮重要作用。3.Rac1通過調(diào)節(jié)片狀偽足的形成,黏著斑的周轉(zhuǎn)和基質(zhì)金屬蛋白酶-2和-9(MMP-2、MMP-9)的表達參與調(diào)控膠質(zhì)瘤細胞的遷移和侵襲。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 遷移 侵襲 Rac1 片狀偽足 黏著斑周轉(zhuǎn)
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• Abstract6-12
• 縮略語/符號說明12-13
• 前言13-15
• 研究現(xiàn)狀、成果13-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、Rac1蛋白在不同級別膠質(zhì)瘤中的表達情況15-24
• 1.1 對象和方法16-20
• 1.1.1 病例資料16
• 1.1.2 主要實驗試劑與儀器（見表 1.1）16
• 1.1.3 實驗方法16-20
• 1.2 結(jié)果20-22
• 1.3 討論22-23
• 1.4 小結(jié)23-24
• 二、Rac1蛋白在膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲中的作用24-35
• 2.1 對象和方法24-29
• 2.1.1 主要實驗試劑與儀器（見表 2.1）24-25
• 2.1.2 細胞培養(yǎng)及實驗分組25-29
• 2.2 結(jié)果29-32
• 2.3 討論32-34
• 2.4 小結(jié)34-35
• 三、Rac1蛋白促進膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲的可能機制35-51
• 3.1 對象和方法35-39
• 3.1.1 主要實驗試劑與儀器（見表 3.1）35-36
• 3.1.2 免疫熒光染色36-39
• 3.2 結(jié)果39-48
• 3.3 討論48-50
• 3.4 小結(jié)50-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻52-57
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明57-59
• 綜述59-70
• 綜述參考文獻64-70
• 致謝70

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1 徐俊杰;于洪泉;國巍;趙偉;金宏;溫娜;齊玲;;西蘭花多肽對大鼠C6膠質(zhì)瘤細胞生長的影響[J];中風與神經(jīng)疾病雜志;2012年11期

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3 仝海波,江澄川,唐鎮(zhèn)生,金一尊;膠質(zhì)瘤細胞化學增敏作用實驗研究[J];山西臨床醫(yī)藥;2000年07期

4 李嗍,王楓,繆珊,駱文靜;過量鋅對鼠膠質(zhì)瘤細胞體外生長的影響[J];解放軍預防醫(yī)學雜志;2001年04期

5 梁一鳴,郭國慶,鄭少俊,沈偉哉;膠質(zhì)瘤血管內(nèi)皮生長因子表達的調(diào)節(jié)[J];臨床與實驗病理學雜志;2001年02期

6 曲元明,韓韜,李桂林,王成偉;血管內(nèi)皮細胞生長因子抗體對膠質(zhì)瘤生長的影響[J];山東醫(yī)科大學學報;2001年02期

7 黃強,董軍;膠質(zhì)瘤的分子外科治療[J];中國微侵襲神經(jīng)外科雜志;2001年04期

8 葉明,周岱,周幽心,王瑋,傅建新,黃煜倫;血管內(nèi)皮生長因子在膠質(zhì)瘤中的表達[J];腫瘤;2002年06期

9 顧宇翔,陳銜城,王宇倩;膠質(zhì)瘤對親細胞非均質(zhì)分子脂質(zhì)和幾種藥物敏感性的比較[J];復旦學報(醫(yī)學版);2003年02期

10 王成偉 ,劉福生 ,曲元明 ,李桂林;血管內(nèi)皮生長因子抗體抑制膠質(zhì)瘤生長的實驗研究[J];中華神經(jīng)外科雜志;2003年01期

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1 李飛;李梅;盧佳友;朱剛;林江凱;孟輝;吳南;陳志;馮華;;脂質(zhì)微區(qū)干擾劑甲基-β-環(huán)糊精影響C6膠質(zhì)瘤細胞侵襲和遷移的體外實驗研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

2 吳安華;王運杰;Ohlfest JR;Wei Chen;Low WC;;膠質(zhì)瘤的生物治療-從實驗室到臨床[A];中華醫(yī)學會神經(jīng)外科學分會第九次學術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 徐宏;韓楊云;孫中書;李新軍;;與膠質(zhì)瘤代謝通路相關(guān)的候選基因篩選[A];中華醫(yī)學會神經(jīng)外科學分會第九次學術(shù)會議論文匯編[C];2010年

4 潘冬生;;多基因修飾膠質(zhì)瘤細胞疫苗的抗腫瘤免疫反應[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第六屆全國代表大會論文匯編[C];2011年

5 俞文華;車志豪;張祖勇;許培源;陸鏞民;傅林;朱強;陳鋒;杜權(quán);;骨橋蛋白在膠質(zhì)瘤細胞中的表達及其信號傳導途徑[A];2005年浙江省神經(jīng)外科學術(shù)會議論文匯編[C];2005年

6 張震;徐克;;低強度超聲誘導C6膠質(zhì)瘤細胞凋亡的體外實驗研究[A];中華醫(yī)學會第十三次全國超聲醫(yī)學學術(shù)會議論文匯編[C];2013年

7 蔣偉峰;高方友;尹浩;;白細胞介素-17及其受體在膠質(zhì)瘤中的表達及臨床意義[A];2013年貴州省神經(jīng)外科年會論文集[C];2013年

8 徐慶生;張小兵;周永慶;;膠質(zhì)瘤干細胞及其放療敏感性[A];2011年浙江省神經(jīng)外科學學術(shù)年會論文匯編[C];2011年

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10 黃強;;膠質(zhì)瘤生成細胞研究[A];第三屆中國腫瘤學術(shù)大會教育論文集[C];2004年

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1 衣曉峰　馮宇曦;中藥三氧化二砷有望成為治療膠質(zhì)瘤新藥[N];中國醫(yī)藥報;2011年

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4 白毅;人腦膠質(zhì)瘤基礎與應用研究喜結(jié)“九大碩果”[N];中國醫(yī)藥報;2006年

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1 董軍;CUL4B在神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤中的作用研究[D];山東大學;2015年

2 張睿;循環(huán)miR-221/222在膠質(zhì)瘤診斷與預后中的價值與基于CED的中樞神經(jīng)系統(tǒng)給藥新方法的研究[D];山東大學;2015年

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1 張大慶;單核細胞趨化蛋白-1在骨髓間充質(zhì)干細胞向膠質(zhì)瘤細胞趨化中的作用研究[D];大連醫(yī)科大學;2012年

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5 張靜文;T細胞過繼免疫治療小鼠腦膠質(zhì)瘤原位模型的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

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10 李文華;Slit2/Robo1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學;2015年

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