本文關(guān)鍵詞：供體來源樹突狀細胞誘導體外擴增Tregs對受體腫瘤免疫的影響

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【摘要】：目的研究過繼輸注體外擴增Tregs治療是否抑制移植物受體的抗腫瘤免疫,以及體外擴增Tregs與供體來源成熟樹突狀細胞共培養(yǎng)是否能夠誘導Tregs的抗原特異性。方法1.取C57BL/6 (H-2b)小鼠或BALB/c (H-2d)小鼠骨髓細胞,在重組鼠源性GM-CSF和IL-4誘導以及TNF-a刺激下分化為成熟樹突狀細胞。2.免疫磁珠法(MACS)從BALB/c或C57BL/6小鼠脾臟分選出CD4+CD25+Tregs,加入anti-CD3/CD28磁珠和高濃度重組鼠源性IL-2(1000U/ml),體外擴增14天。3.在給予低濃度重組鼠源性IL-2 (200U/ml)的條件下,體外擴增后CD4+CD25+ regs與成熟樹突狀細胞(C57BL/6小鼠CD4+CD25+ Tregs與BALB/c小鼠成熟樹突狀細胞或者BALB/c小鼠CD4+CD25+ Tregs與C57BL/6小鼠成熟樹突狀細胞)混合培養(yǎng)7天。4.流式細胞術(shù)檢測成熟樹突狀細胞及Tregs純度,混合淋巴細胞反應(yīng)檢測Tregs體外抑制功能。5.構(gòu)建小鼠皮膚移植模型檢測Tregs體內(nèi)抑制功能。6.分別注射B16-F10(小鼠黑色素瘤細胞,H-2b)于C57BL/6和BALB/c小鼠,建立小鼠腫瘤模型。7.收集擴增后及誘導后Tregs分別過繼輸注于C57BL/6和BALB/c小鼠體內(nèi),24小時后注射B16-F10。8.14天后處死小鼠,觀察肺部腫瘤結(jié)節(jié)并記數(shù)。結(jié)果1.擴增后及誘導后Tregs與新鮮分選Tregs相比,純度和免疫抑制功能無明顯下降。2.擴增后及誘導后Tregs能夠顯著延長同種異體皮膚移植物生存時間(14.5天Vs 9天,β0.05)。3.C57BL/6小鼠單獨注射5×105B16-F10,14天后肺部腫瘤結(jié)節(jié)為93+12個,預先輸注1×107體外擴增后Tregs,24小時后注射5×10。B16-F10,肺部腫瘤結(jié)節(jié)為355±15個,而預先輸注1×107誘導后Tregs,24小時后注射5×105B16-F10,肺部腫瘤結(jié)節(jié)為195±13個,相比單獨注射B16-F10,后兩者肺部腫瘤結(jié)節(jié)明顯增加(p0.05)。4.單獨注射5×10B16-F10, BALB/c小鼠肺部腫瘤結(jié)節(jié)為9±-6個,預先輸注1×107體外擴增后Tregs,24小時后注射5×105B16-F10,肺部腫瘤結(jié)節(jié)為124+4個,而預先輸注1×107誘導后Tregs,24小時后注射5×105B16-F10,肺部腫瘤結(jié)節(jié)為297±-18個,與單獨注射B16-F10相比,后兩者肺部腫瘤結(jié)節(jié)明顯增加(p0.05)。結(jié)論1.通過MACS分選,Tregs純度能夠達到95%以上。2.通過體外擴增,我們能夠得到足量的具有免疫抑制功能的Tregs 。3.過繼輸注一定數(shù)量體外擴增后Tregs能夠抑制機體的抗腫瘤免疫,引起MHC完全匹配(受體來源)或完全不匹配(供體來源)腫瘤的發(fā)生。4.體外擴增后Tregs與供體來源成熟樹突狀細胞混合培養(yǎng)能夠誘導Tregs的抗原特異性。
【關(guān)鍵詞】：調(diào)節(jié)性T細胞 成熟樹突狀細胞 腫瘤
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.3
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-14
• 1 材料與方法14-22
• 2 結(jié)果22-31
• 3 討論31-34
• 全文總結(jié)34-35
• 參考文獻35-39
• 文獻綜述39-49
• 參考文獻44-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文50

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本文編號：580280