本文關鍵詞：miR-146a對去勢抵抗性前列腺癌自噬的調(diào)控及其調(diào)控通路的初步探討

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【摘要】：目的本實驗通過觀察去勢抵抗性前列腺癌患者標本中癌組織內(nèi)自噬相關蛋白的表達,并在體外實驗中研究miR-146a對去勢抵抗性前列腺癌的白噬水平的影響,并初步探討miR-146a對去勢抵抗性前列腺癌調(diào)控自噬的分子機制。方法1、應用脂質(zhì)體Lipofactmin2000轉(zhuǎn)染miR-146a和miRNA陰性對照(negative control, NC)至去勢抵抗性前列腺癌細胞系(DU-145和PC3細胞系),分別收集處理后6h、12h、24h、48h、72h的前列腺癌細胞,制成電鏡標本觀察實驗組和對照組細胞的自噬超微結構,并進行對比。2、將發(fā)生自噬時間段的前列腺癌細胞系培養(yǎng)并提取蛋白,運用Western blotting檢測微管相關蛋白1輕鏈3(LC3)的胞漿型(LC3-I)和膜型(LC3-II)的表達量改變3、臨床收集去勢抵抗性前列腺癌(castration resistant prostate cancer,CRPC)患者經(jīng)尿道前列腺電切病理標本共6例,按照Gleason評分等于7分的1例和等于8分的3例以及大于8分的2例,用免疫組化的方法觀察6例標本癌組織和癌旁組織自噬相關蛋白表達的改變4、應用脂質(zhì)體Lipofactmin2000轉(zhuǎn)染分別miR-146a和對照的miRNA到相應前列腺癌細胞系,應用免疫熒光檢測自噬相關蛋白LC3的表達。結果1、將轉(zhuǎn)染miR-146a后6h、12h、24h、48h、72h的DU-145和PC3細胞系制成電鏡標本發(fā)現(xiàn)DU-145轉(zhuǎn)染miR-146a24小時后實驗組自噬體明顯增加,提示miR-146a對DU-145細胞系有促進自噬的作用,PC-3細胞系各個時間段都無明顯差別。2、轉(zhuǎn)染24小時后DU-145細胞系的LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值是對照組兩倍,提示自噬水平增強。3、將6例去勢抵抗性前列腺癌患者的標本進行免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)癌組織的自噬水平較癌旁組織低,提示去勢抵抗性前列腺癌miR-146a的低水平導致自噬水平低。4、在熒光顯微鏡下檢測轉(zhuǎn)染,miR-146a的前列腺癌細胞系(DU-145)觀察到LC3表達增加。結論：1、miR-146a對去勢抵抗性前列腺癌細胞系DU-145有促進自噬的作用,自噬發(fā)生的高峰時期在24小時左右。2、組織標本中去勢抵抗性前列腺癌細胞因低表達miR-146a,因此自噬水平較癌旁組織低,側面提示1miR-146a能促進CRPC自噬水平。
【關鍵詞】：去勢抵抗性前列腺癌 miR-146a 自噬
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 縮略詞9-10
• 前言10-12
• 文獻綜述12-15
• 第一部分 材料和方法15-32
• 第二部分 實驗結果32-36
• 第三部分 討論36-41
• 第四部分 結論41-42
• 致謝42-43
• 參考文獻43-47
• 作者簡介47

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本文編號：557634