本文關(guān)鍵詞：Ndfip1對(duì)奧沙利鉑誘導(dǎo)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用

  更多相關(guān)文章： Ndfip1 神經(jīng)保護(hù) 細(xì)胞凋亡 奧沙利鉑 SH-SY5Y 帕金森病

【摘要】：研究表明,在帕金森病患者腦組織中發(fā)現(xiàn)有大量的神經(jīng)元發(fā)生程序性死亡,即細(xì)胞凋亡,有關(guān)實(shí)驗(yàn)證明,神經(jīng)細(xì)胞損傷后高表達(dá)的Ndfip1蛋白,可與Nedd4家族蛋白結(jié)合,通過(guò)泛素化清除錯(cuò)誤折疊的蛋白,進(jìn)而抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。本實(shí)驗(yàn)采用了入神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞及過(guò)表達(dá)Ndfip1蛋白的SN-MC-1細(xì)胞作為研究對(duì)象,通過(guò)奧沙利鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,研究在Ndfip1蛋白過(guò)表達(dá)情況下對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞增殖和凋亡的影響,探討Ndfip1對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。第一部分穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Ndfip1的SH-SY5Y細(xì)胞的鑒定。首先通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)室凍存細(xì)胞的復(fù)蘇,傳代以獲得穩(wěn)定生長(zhǎng)的SH-SY5Y和SN-MC-1細(xì)胞,同時(shí)通過(guò)Western Blot法對(duì)SN-MC-1細(xì)胞蛋白表達(dá)進(jìn)行鑒定,確認(rèn)獲得穩(wěn)定可控的Ndfip1蛋白表達(dá),供本次實(shí)驗(yàn)所用,并通過(guò)細(xì)胞凍存,使得細(xì)胞株得以延續(xù)。第二部分Ndfip1對(duì)奧沙利鉑誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。首先,選取典型抗腫瘤藥物奧沙利鉑,作用于SH-SY5 Y細(xì)胞,通過(guò)MTT比色法,鑒別經(jīng)不同藥物濃度及不同作用時(shí)間作用后對(duì)細(xì)胞生存率的影響情況,并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,得出半數(shù)有效抑制濃度；然后通過(guò)加入4-HT誘導(dǎo)SN-MC-1細(xì)胞大量表達(dá)Ndfi P1蛋白,經(jīng)MTT比色法可觀察到Ndfip1蛋白高表達(dá)后的SH-SY5Y細(xì)胞較野生型細(xì)胞增殖抑制率有所下降,推斷Ndfip1蛋白能夠?qū)箠W沙利鉑對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞的增殖抑制作用。最后利用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)單獨(dú)應(yīng)用奧沙利鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡水平,以及過(guò)表達(dá)的Ndfip1蛋白對(duì)奧沙利鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響,同時(shí)對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,結(jié)果提示Ndfip1蛋白對(duì)奧沙利鉑誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用,同時(shí)檢測(cè)到凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)的減少,進(jìn)一步表明Ndfip1蛋白可能通過(guò)抗凋亡作用實(shí)現(xiàn)其神經(jīng)保護(hù)作用。綜上,本實(shí)驗(yàn)佐證了Ndfip1蛋白對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用,表明其可能對(duì)帕金森病的治療具有潛在的正性作用,進(jìn)一步研究其抗凋亡機(jī)制及相關(guān)作用靶點(diǎn)和信號(hào)通路,會(huì)對(duì)疾病的治療產(chǎn)生積極的影響。
【關(guān)鍵詞】：Ndfip1 神經(jīng)保護(hù) 細(xì)胞凋亡 奧沙利鉑 SH-SY5Y 帕金森病
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R739.4
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 符號(hào)說(shuō)明6-7
• 前言7-9
• 第一部分 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Ndfip1的SH-SY5Y細(xì)胞的鑒定9-15
• 1. 材料9-10
• 2. 方法10-13
• 3. 結(jié)果13-14
• 4. 討論14-15
• 第二部分 Ndfip1對(duì)奧沙利鉑誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用15-28
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料16-17
• 2. 方法及結(jié)果17-27
• 3. 討論27-28
• 總結(jié)與討論28-30
• 參考文獻(xiàn)30-32
• 文獻(xiàn)綜述32-39
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 致謝39-40
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄40-41

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 蔣新鋒;Ndfip1對(duì)奧沙利鉑誘導(dǎo)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：546186