本文關鍵詞：2-甲氧基雌二醇對鼻咽癌CNE-2干細胞增殖、遷移及放療抵抗性的影響及機制

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【摘要】：背景及目的:腫瘤干細胞(cancer stem cell,CSC)理論表明,腫瘤放療抵抗的根源在于其干細胞的存在,然而其機制還不夠清晰。2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyestradiol,2-ME2)是雌激素在體內的代謝產物。最近研究發(fā)現(xiàn)2-ME2能通過調節(jié)轉錄因子活性(包括NF-κB/HIF-1),介導多種腫瘤的凋亡與化療的抵抗,因而目前正作為一種抗腫瘤藥物被研究。本研究的目的是明確2-ME2對鼻咽癌CNE-2干細胞(nasopharyngeal carcinoma CNE-2 stem cells,NPCSC)增殖、遷移與放療抵抗的影響及其機制,對降低鼻咽癌干細胞的放療抵抗,進而提高鼻咽癌的治愈率具有重要意義。方法:1 NPCSC模型建立利用無血清懸浮系統(tǒng)富集獲得鼻咽癌CNE-2干細胞,并通過再分化、軟瓊脂克隆、Transwell小室實驗和FCM法檢測富集獲得的CNE-2干細胞分化、自我更新、遷移及CD133+細胞比例的變化。RT-PCR法檢測NPCSC中干細胞表面標志物Bmi-1、Twist1和Oct4 mRNA的表達。克隆形成實驗檢測NPCSC對放療的抵抗性。22-ME2對NPCSC增殖、遷移及放療抵抗性的影響及機制探討采用不同濃度的2-ME2(0、4和8μmol/L)處理CNE-2干細胞,再聯(lián)合X射線(0/2/4/8GY)照射,CCK-8及Transwell檢測干細胞增殖及遷移能力的變化,克隆形成實驗檢測NPCSC放療抵抗性的改變;FCM及蛋白質印跡法檢測不同濃度2-ME2處理后干細胞CD133+細胞比例變化及HIF-1α、NF-κB p65和上皮-間質轉換(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相關標志物蛋白的表達。3 NF-κB p65對2-ME2抗癌效應的影響及機制利用慢病毒轉染技術沉默NF-κB p65基因,聯(lián)合X射線照射,探討NF-κB p65對2-ME2抗癌效應的影響。結果:1該方法獲得的干樣細胞具有較強的自我更新及分化能力,相對于親本CNE-2細胞具有更強的克隆(p0.01)及遷移(p0.01)能力、更高的CD133+細胞比例(p0.01)及干性基因比例(p0.05),說明該細胞具有較強干性。同時克隆形成實驗顯示干樣細胞對放療具有較強的抵抗性。我們將此細胞作為NPCSC用于后續(xù)實驗。2 2-ME2(0/4/8μmol/L)處理NPCSC后,隨濃度增加,NPCSC增殖活力降低,遷移能力降低,對放療抵抗性降低,同時CD133+細胞比例降低,HIF-1α、NF-κB p65蛋白表達降低,EMT標志物E-cad增加、N-cad及Vimentin降低。3沉默NF-κB p65后,隨2-ME2濃度增加,鼻咽癌干細胞的增殖、遷移及放療敏感性沉默組比對照組下降更加明顯。結論:2-甲氧基雌二醇抑制鼻咽癌CNE-2干細胞的增殖及遷移能力并降低其放療抵抗,其機制可能為2-甲氧基雌二醇抑制HIF-1/NF-κB信號通路并逆轉細胞EMT。
【關鍵詞】：2-甲氧基雌二醇 鼻咽癌 腫瘤干細胞 NF-κB HIF-1
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.63
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 第一節(jié) 鼻咽癌CNE-2 干細胞模型的建立10-15
• 前言10
• 1 方法10-13
• 2 結果13-14
• 3 討論14-15
• 第二節(jié) 2-甲氧基雌二醇對鼻咽癌干細胞增殖、遷移及放療抵抗性的影響及機制探討15-20
• 前言15
• 1 材料與方法15-17
• 2 結果17-18
• 3 討論18-20
• 第三節(jié) NF-κB p65對 2-甲氧基雌二醇抗癌效應的影響及機制20-24
• 前言20
• 1 方法20-22
• 2 結果22-23
• 3 討論23-24
• 全文總結24-25
• 附圖25-29
• 參考文獻29-33
• 文獻綜述33-35
• 致謝35-36
• 攻讀學位期間發(fā)表的論文36

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本文編號：537643