本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞的化療保護(hù)作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 急性髓系白血病 脂肪細(xì)胞 二甲雙胍 化療保護(hù)

【摘要】：目的:急性髓系白血病(AML)惡性程度高、預(yù)后差,與其骨髓微環(huán)境密切相關(guān)。脂肪細(xì)胞作為微環(huán)境中重要組分,參與白血病發(fā)生發(fā)展,但有關(guān)骨髓原位脂肪細(xì)胞的作用研究仍存在諸多盲點(diǎn)。二甲雙胍是廣泛應(yīng)用的口服降糖藥物,被研究證實(shí)可通過抑制脂肪生成,阻斷實(shí)體腫瘤細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移,但其能否調(diào)控白血病骨髓脂肪細(xì)胞作用尚未見相關(guān)報(bào)道。本研究對(duì)初發(fā)AML及正常者骨髓活檢切片進(jìn)行回顧性分析,運(yùn)用計(jì)算機(jī)網(wǎng)格計(jì)點(diǎn)法精確定量骨髓脂肪細(xì)胞特征,初步探討骨髓原位脂肪細(xì)胞與成人AML難治間的相關(guān)性。體外誘導(dǎo)白血病患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)成脂分化,明確其對(duì)白血病細(xì)胞的化療保護(hù)及可能作用機(jī)制;與此同時(shí),給予二甲雙胍干預(yù),探討二甲雙胍對(duì)脂肪細(xì)胞調(diào)控白血病細(xì)胞抵抗化療的影響,為白血病靶向治療提供新思路。方法:(1)建立自主研發(fā)計(jì)算機(jī)網(wǎng)格計(jì)點(diǎn)軟件,檢測(cè)61例初發(fā)AML患者與71例臨床診斷正常者骨髓脂肪細(xì)胞特征(含量及大小),比較兩組間差異;并依據(jù)預(yù)后將初發(fā)AML患者分為緩解組及難治組,分析骨髓脂肪細(xì)胞特征與AML難治性的相關(guān)性。(2)將初發(fā)AML及正常者骨髓MSC誘導(dǎo)成脂分化,油紅染色觀察脂肪細(xì)胞形態(tài),q RT-PCR檢測(cè)成脂基因(PPARγ、C/EBPα、FABP4)的表達(dá),驗(yàn)證脂肪細(xì)胞形成。(3)構(gòu)建脂肪細(xì)胞與THP-1細(xì)胞共培養(yǎng)體系,篩選阿糖胞苷(Ara-c)最佳作用濃度,研究初發(fā)AML與正常者骨髓MSC衍生脂肪細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞化療敏感性的差別;蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)AML骨髓上清上調(diào)蛋白并根據(jù)調(diào)變程度及文獻(xiàn)選擇脂肪因子;Western Blot結(jié)合q RT-PCR驗(yàn)證兩組患者骨髓MSC衍生脂肪細(xì)胞中調(diào)變蛋白表達(dá)情況。(4)初發(fā)AML患者骨髓MSC誘導(dǎo)形成脂肪細(xì)胞,與第19天加入5mmol/L二甲雙胍進(jìn)行干預(yù)48h,并設(shè)立對(duì)照組。油紅染色觀察兩組成脂率,q RT-PCR檢測(cè)成脂基因PPARγ、C/EBPα、FABP4m RNA表達(dá)水平差異;在Ara-c作用下,建立白血病細(xì)胞系(THP-1)與脂肪細(xì)胞的直接共培養(yǎng)模型,通過細(xì)胞計(jì)數(shù)比較兩組對(duì)白血病細(xì)胞系化療保護(hù)的差異,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)THP-1凋亡變化。(5)收集二甲雙胍調(diào)節(jié)的脂肪細(xì)胞上清(met-CM)與未加入二甲雙胍脂肪細(xì)胞上清(control-CM),上清液與腫瘤細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)基按不同比例稀釋后重懸白血病細(xì)胞,同時(shí)加入化療藥物Ara-c,48h后研究各比例狀態(tài)下THP-1的存活數(shù);比較二甲雙胍處理與未處理的脂肪細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞化療敏感性的影響。(6)Western Blot及q RT-PCR法檢測(cè)二甲雙胍處理前后組脂肪細(xì)胞Leptin因子蛋白及m RNA表達(dá)水平,明確Leptin在二甲雙胍調(diào)控白血病脂肪細(xì)胞化療保護(hù)中的作用。結(jié)果:(1)AML初發(fā)患者骨髓脂肪細(xì)胞較正常者含量少、體積小(P0.0001);難治組AML患者骨髓脂肪含量比非難治組減少(P0.05)。此外,骨髓脂肪含量與患者年齡正相關(guān),與骨髓原始細(xì)胞量、性別、BMI均無相關(guān)性;(2)在Ara-c的作用下,AML骨髓MSC體外誘導(dǎo)分化的脂肪細(xì)胞與THP-1共培養(yǎng),與正常組相比,THP-1細(xì)胞對(duì)化療藥敏感性明顯降低,細(xì)胞存活數(shù)顯著升高(P0.001);(3)蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)AML骨髓上清高分泌脂肪因子Leptin、Resistin和Growth Hormone。而Leptin在初發(fā)AML患者骨髓MSC衍生脂肪細(xì)胞中表達(dá)明顯增高(P0.001);(4)與對(duì)照組相比較,AML骨髓MSC衍生脂肪細(xì)胞經(jīng)二甲雙胍處理后,成脂率、成脂基因表達(dá)水平無明顯改變(P0.05);但與THP-1直接或間接共培養(yǎng),均可降低THP-1化療的抵抗性,促進(jìn)THP-1細(xì)胞凋亡(P0.05);(5)二甲雙胍可以降低脂肪細(xì)胞Leptin蛋白及m RNA表達(dá)水平(P0.01)。結(jié)論:1.AML患者骨髓脂肪細(xì)胞含量少,體積小,參與AML化療抵抗,與其難治性密切相關(guān);異常高分泌的脂肪因子Leptin可能是調(diào)控骨髓脂肪細(xì)胞保護(hù)白血病免受化療損傷的機(jī)制。提示骨髓脂肪細(xì)胞可作為初發(fā)AML患者預(yù)后不良的一個(gè)重要因素,深入研究其作用機(jī)制可指導(dǎo)臨床早期干預(yù)治療。2.二甲雙胍可降低AML骨髓脂肪細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞抵抗化療的保護(hù)作用。其可能機(jī)制一方面在于降低脂肪上清中脂肪因子Leptin的分泌;另一方面在于降低了脂肪細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的抗凋亡作用。
【關(guān)鍵詞】：急性髓系白血病 脂肪細(xì)胞 二甲雙胍 化療保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.7
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-15
• 第一部分 骨髓脂肪細(xì)胞與AML難治的相關(guān)性分析及其可能機(jī)制15-49
• 引言15-16
• 材料和方法16-34
• 結(jié)果34-46
• 討論46-49
• 第二部分 二甲雙胍抑制AML骨髓脂肪細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞化療保護(hù)的作用及機(jī)制研究49-72
• 引言49-50
• 材料與方法50-63
• 結(jié)果63-69
• 討論69-72
• 全文結(jié)論72-73
• 參考文獻(xiàn)73-78
• 致謝78-81
• 學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄81

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本文編號(hào)：527779