本文關(guān)鍵詞：SOCS3基因?qū)ψ訉m內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖和遷移作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：世界范圍內(nèi),子宮內(nèi)膜癌是僅次于宮頸癌的女性生殖道惡性腫瘤,且其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。目前在西方這一腫瘤已成為女性生殖道腫瘤中最為常見(jiàn)的病種,占新發(fā)現(xiàn)婦科腫瘤的一半。一般而言,患者年齡在60至70歲之間,而一般女性一生中罹患子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險(xiǎn)在2.5%左右。90%子宮內(nèi)膜癌患者的臨床癥狀表現(xiàn)為絕經(jīng)后陰道流血,不過(guò)絕經(jīng)后的陰道流血患者中僅有10%最后確診為子宮內(nèi)膜癌,部分患者還可出現(xiàn)陰道流液,此類患者早期可僅表現(xiàn)為少量血性白帶,隨著疾病進(jìn)展而發(fā)生嚴(yán)重感染時(shí)可出現(xiàn)膿血樣液體排出。絕經(jīng)前女性的首發(fā)癥狀則往往為月經(jīng)周期混亂,并有部分患者在宮頸涂片檢查中偶然發(fā)現(xiàn)異常子宮內(nèi)膜細(xì)胞。根據(jù)FIGO(2009)分期,子宮內(nèi)膜癌可分為4期：Ⅰ期指腫瘤局限于子宮體部,并進(jìn)一步分為Ia期及Ib期,其中Ia期腫瘤浸潤(rùn)深度小于子宮肌層二分之一,而Ib期腫瘤浸潤(rùn)深度則已超過(guò)或等于子宮肌層的二分之一；Ⅱ期指腫瘤已侵犯宮頸間質(zhì),但尚無(wú)宮體外蔓延；Ⅲ期指腫瘤已有局部和(或)區(qū)域擴(kuò)散,其中Ⅲa期指腫瘤已侵犯子宮漿膜層和(或)附件,Ⅲb期指腫瘤已侵犯陰道和(或)宮旁組織,Ⅲc期指盆腔淋巴結(jié)和(或)腹主動(dòng)脈旁淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,Ⅲcl期指盆腔淋巴結(jié)陽(yáng)性,Ⅲc2期指腹主動(dòng)脈旁淋巴結(jié)陽(yáng)性伴(或不伴)盆腔淋巴結(jié)陽(yáng)性；Ⅳ期指腫瘤侵犯膀胱和(或)直腸粘膜,和(或)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,Ⅳa期指腫瘤侵犯膀胱和(或)直腸粘膜,4b期腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,包括腹腔內(nèi)和(或)腹股溝淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。80～90%屬于內(nèi)膜樣癌,按腺癌分化程度分為Ⅰ級(jí)(高分化G1),Ⅱ級(jí)(中分化G2),Ⅲ級(jí)(低分化G3)三級(jí)。對(duì)于子宮內(nèi)膜癌而言,其預(yù)后整體而言相對(duì)較好,且多數(shù)患者在就診時(shí)多處于疾病早期。影響預(yù)后的因素主要有：1、腫瘤的惡性程度及病變范圍,包括手術(shù)病理分期、組織學(xué)類型、腫瘤分級(jí)、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴轉(zhuǎn)移及子宮外轉(zhuǎn)移等；2、患者全身狀況；3、治療方案的選擇。多數(shù)子宮內(nèi)膜癌的復(fù)發(fā)在手術(shù)治療后的2-3年內(nèi)出現(xiàn)。對(duì)于子宮內(nèi)膜癌的首選治療方式為手術(shù),手術(shù)目的是進(jìn)行手術(shù)病理分期,確定病變范圍及手術(shù)預(yù)后相關(guān)因素,切除病變子宮及其他可能存在轉(zhuǎn)移的病灶,首先留取腹腔積液或盆腔沖洗液進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查,然后腹腔探查。如考慮存在子宮外部侵犯的患者,還需進(jìn)行擴(kuò)大的筋膜外子宮切除術(shù)及雙側(cè)輸卵管卵巢切除。同時(shí),許多患者在術(shù)后為避免陰道穹窿的復(fù)發(fā)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等原因仍需接受輔助治療。在手術(shù)術(shù)式選擇中,目前已有充足證據(jù)支持使用腹腔鏡進(jìn)行子宮切除術(shù)或者是腹腔鏡輔助下的經(jīng)陰道子宮切除術(shù)。放療也是常用的治療方式,這一治療既可用于術(shù)后的輔助治療,也可單獨(dú)作為不適宜接受手術(shù)患者的根治性治療,并且可應(yīng)用于術(shù)后復(fù)發(fā)患者的局部治療。目前盡管術(shù)后輔助性放療可以改善局部復(fù)發(fā)控制情況,但對(duì)于患者的整體生存仍無(wú)明顯改善。與之相比,對(duì)于高�；颊叩脑缙诨熌壳吧袩o(wú)統(tǒng)一定論。目前認(rèn)為子宮內(nèi)膜癌有兩種發(fā)病類型：雌激素依賴型(Ⅰ型)與(Ⅱ型)非雌激素依賴型,子宮內(nèi)膜癌絕大多數(shù)(80%)屬于Ⅰ型,該型往往繼發(fā)于子宮內(nèi)膜不典型增生。肥胖、不孕、胰島素抵抗以及長(zhǎng)期無(wú)孕激素拮抗的應(yīng)用雌激素治療等因素均與Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌發(fā)病相關(guān)。而Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌則包括子宮內(nèi)膜漿液性癌、透明細(xì)胞癌、腺鱗癌、粘液腺癌等類型,與雌激素作用無(wú)關(guān),癌灶容易擴(kuò)散,預(yù)后較差。兩者在分子機(jī)制層面也各具特點(diǎn)。Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌通常具有PTEN抑癌基因、K-ras、Beta-catenin等基因的突變及錯(cuò)配修復(fù)基因缺陷有關(guān)。而Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌多與p53抑癌基因的突變相關(guān)。可見(jiàn)子宮內(nèi)膜癌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,而具體發(fā)病的機(jī)理卻尚未明確闡明�？梢�(jiàn)目前子宮內(nèi)膜癌的治療仍充滿挑戰(zhàn),而對(duì)其致病分子機(jī)制的研究則可能使我們獲得更為有效、特異的治療方式。這其中針對(duì)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖及遷移等與預(yù)后密切相關(guān)的分子信號(hào)通路的研究一直是子宮內(nèi)膜癌研究領(lǐng)域的中心問(wèn)題。細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子(suppressor of cytokine signaling,SOCS)家族在調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化等方面發(fā)揮重要作用,該家族在惡性腫瘤疾病中的作用已日益引起人們的關(guān)注。SOCS家族是1997年以來(lái)相繼被發(fā)現(xiàn)的JAK/STAT信號(hào)通路的主要負(fù)性調(diào)控因子家族,由SOCS1-SOCS7和CIS共8種成員組成,其結(jié)構(gòu)相似,由N區(qū)、中央?yún)^(qū)SH2結(jié)構(gòu)域和C端SOCS盒組成。目前對(duì)SOCS3的研究較為清楚,其廣泛表達(dá)于不同類型組織和細(xì)胞中。SOCS3基因(NM 003955.3)位于17q25.3, CDS區(qū)由675個(gè)連續(xù)的核苷酸組成,編碼225個(gè)氨基酸,編碼框的上游約1.1kb范圍內(nèi)是該基因的啟動(dòng)子區(qū),其在人、大鼠、小鼠之間具有高度保守性,均由兩個(gè)STAT結(jié)合域、一個(gè)TAT框和一個(gè)GC富集區(qū)組成。SOCS-3基因的啟動(dòng)子含有STAT1/STAT3和STAT5b的結(jié)合位點(diǎn)。這類因子主要與JAK/STAT信號(hào)傳導(dǎo)通路相互作用。SOCS-3是SOCS家族中研究最多的成員之一,已有研究提示多種腫瘤組織中SOCS3基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島存在高度甲基化,而基因啟動(dòng)子區(qū)失活是導(dǎo)致抑癌基因失活的主要機(jī)制,SOCS3基因可能作為一個(gè)抑癌基因發(fā)揮作用。He首次于2003年發(fā)現(xiàn)了在人肺癌中SOCS3啟動(dòng)子超甲基化導(dǎo)致其基因沉默,SOCS3蛋白表達(dá)缺失。Weber等報(bào)道的94例頭頸鱗狀細(xì)胞癌中僅有10例發(fā)現(xiàn)SOCS-3蛋白表達(dá)為陽(yáng)性,且其中9例組織中SOCS-3啟動(dòng)子CpG島呈超甲基化狀態(tài)。而將SOCS-3導(dǎo)入CAL-27細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),過(guò)表達(dá)的SOCS-3能明顯抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)。Cui等發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞中通過(guò)轉(zhuǎn)入SOCS-3可以抑制STAT3的磷酸化,并介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡。目前認(rèn)為SOCS基因啟動(dòng)子區(qū)域CpG島的異常高度甲基化是導(dǎo)致基因沉默的主要機(jī)制。而已知的SOCS3與JAK/STAT通路相互作用途徑主要有3種：①抑制JAK激酶活性阻斷JAK/STAT通路；②與細(xì)胞因子受體結(jié)合,拮抗STAT對(duì)活化受體的激活；③通過(guò)SOCS盒促進(jìn)所結(jié)合蛋白發(fā)生蛋白酶體依賴途徑的降解。SOCS-3通過(guò)上述機(jī)制抑制STAT3磷酸化,負(fù)反饋抑制JAK/STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,從而抑制了腫瘤的生長(zhǎng)。而在與激素分泌相關(guān)的腫瘤中,SOCS-3則對(duì)腫瘤增殖起到促進(jìn)作用。但近期對(duì)于卵巢癌的研究也提示腫瘤細(xì)胞中存在SOCS3,并可進(jìn)一步激活STAT-3磷酸化,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞存活。而對(duì)于子宮內(nèi)膜癌而言,目前尚不確定SOCS家族在其發(fā)展中所起的作用。目的：探索子宮內(nèi)膜癌中SOCS-3的表達(dá)情況,以及其對(duì)子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細(xì)胞系增殖遷移能力的影響,評(píng)估SOCS3作為潛在治療靶點(diǎn)的可能性,探討其在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的可能機(jī)制。從而為子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制研究奠定基礎(chǔ),為子宮內(nèi)膜癌的臨床預(yù)防及治療提供新的思路。方法：采用免疫組化染色法檢測(cè)正常子宮內(nèi)膜組織及子宮內(nèi)膜癌組織中的SOCS3表達(dá)情況,分析兩者間的表達(dá)差異,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。構(gòu)建SOCS3載體質(zhì)粒,以慢病毒包裝并轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞擴(kuò)增病毒,收取病毒液后對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染以構(gòu)建SOCS3穩(wěn)定表達(dá)的子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細(xì)胞系,以空載體HEC-1B細(xì)胞系作為對(duì)照。對(duì)兩組HEC-1B細(xì)胞進(jìn)行單克隆培養(yǎng),QPCR鑒定SOCS3穩(wěn)定細(xì)胞系SOCS3表達(dá)情況。之后分別提取蛋白,BCA法行蛋白定量,SDS電泳轉(zhuǎn)膜后行免疫反應(yīng),并利用化學(xué)發(fā)光進(jìn)行顯影、定影以觀察兩種細(xì)胞中SOCS3的表達(dá)情況。之后應(yīng)用EdU標(biāo)記法及MTT實(shí)驗(yàn)比較SOCS3穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞與空載體對(duì)照細(xì)胞增殖水平,以流式細(xì)胞計(jì)數(shù)比較兩者細(xì)胞周期情況,并以Transwell法檢測(cè)兩種細(xì)胞遷移能力的差別。結(jié)果：免疫組化結(jié)果提示SOCS3在腫瘤組織中的表達(dá)明顯低于正常子宮內(nèi)膜組織,正常子宮內(nèi)膜組織與子宮內(nèi)膜癌組織中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率分別為90%(18/20)和31.9%(43/135),兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=16.860,P0.001)。利用慢病毒包裝的SOCS3載體與空載體分別成功轉(zhuǎn)染了兩組HEC-1B細(xì)胞,對(duì)其進(jìn)行傳代培養(yǎng),熒光染色、QPCR及Western Blot鑒定結(jié)果提示SOCS3穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系成功建立。EdU標(biāo)記法測(cè)定提示,與空載體對(duì)照組相比,SOCS3穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系EdU標(biāo)記減少,提示其DNA合成活動(dòng)減弱,細(xì)胞增殖速度低。而MTT實(shí)驗(yàn)則進(jìn)一步支持了這一結(jié)論。通過(guò)對(duì)兩組細(xì)胞在第1至7天吸光度比較,兩者自第5天開(kāi)始細(xì)胞數(shù)量出現(xiàn)明顯差別,SOCS3穩(wěn)定表達(dá)HEC-1B細(xì)胞系細(xì)胞數(shù)量低于空載體對(duì)照組。其差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)行檢測(cè)提示SOCS3穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞多停滯于G0/G1期,S期及G2期細(xì)胞數(shù)量降低。Transwell實(shí)驗(yàn)則進(jìn)一步提示SOCS3穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞遷移能力降低。結(jié)論：SOCS3在子宮內(nèi)膜癌組織中低表達(dá),而在SOCS3穩(wěn)定表達(dá)的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中,相比于空載體對(duì)照細(xì)胞,其增殖能力與遷移能力均有所下降。這一結(jié)果提示SOCS3可能在子宮內(nèi)膜癌中起到抑制癌癥發(fā)生發(fā)展的作用,而子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病可能與SOCS3的表達(dá)受抑制相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：SOCS3 子宮內(nèi)膜癌 細(xì)胞增殖 細(xì)胞遷移
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-14
• 前言14-18
• 第一部分 穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SOCS3子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株的構(gòu)建18-45
• 1 實(shí)驗(yàn)材料18-22
• 2 實(shí)驗(yàn)方法22-24
• 3、酶切位點(diǎn)及PCR引物24-25
• 4、PCR擴(kuò)增25-28
• 5、SOCS3基因擴(kuò)增產(chǎn)物酶切,載體酶切,連接,轉(zhuǎn)化28-29
• 6、人SOCS3基因克隆鑒定29
• 7、質(zhì)粒提取29-31
• 8、慢病毒制備31-35
• 9、病毒液感染人HEC-1B子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞35-36
• 10、穩(wěn)定細(xì)胞系檢測(cè)36-40
• 11、WESTERN BLOT驗(yàn)證40-41
• 12、實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-45
• 第二部分 SOCS3基因?qū)ψ訉m內(nèi)膜癌細(xì)胞功能的影響45-56
• 1、實(shí)驗(yàn)材料45-47
• 2、實(shí)驗(yàn)方法47-50
• 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析50
• 4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-56
• 全文討論56-65
• 參考文獻(xiàn)65-73
• 全文總結(jié)73-75
• 縮寫(xiě)詞簡(jiǎn)表75-78
• 攻讀學(xué)位期間成果78-79
• 致謝79-81

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7 劉青娟;炎癥在糖尿病腎病發(fā)病中的作用及細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子SOCS-1、SOCS-3的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

8 廖立紅;SOCS干預(yù)對(duì)IUGR大鼠骨骼肌細(xì)胞代謝的影響及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2011年

9 呂曉輝;STAT3及SOCS3信號(hào)分子在肝前體細(xì)胞增殖分化過(guò)程中的作用[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2007年

10 張四洋;SOCS3及PYK2對(duì)非小細(xì)胞肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：SOCS3基因?qū)ψ訉m內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖和遷移作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：503469