發(fā)布時間：2017-06-30 16:18

  本文關鍵詞：膠質瘤干細胞誘導宿主肝組織內腫瘤間質細胞惡性轉化的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分:雙色熒光示蹤人膠質瘤干細胞肝臟異位移植模型的建立及生物學特征分析目的:通過建立紅、綠雙色熒光示蹤膠質瘤干細胞異位肝臟移植模型,為進一步研究異位移植瘤的腫瘤微環(huán)境奠定基礎。方法:將攜帶紅色熒光蛋白(RFP)基因的慢病毒轉染人膠質瘤干細胞SU3,獲得穩(wěn)定高表達RFP的SU3-RFP細胞株,接種于表達綠色熒光蛋白(GFP)的轉基因裸小鼠肝臟內,致瘤后取部分荷瘤鼠載瘤肝臟,于熒光成像系統(tǒng)觀察;其它荷瘤鼠用4%多聚甲醛心臟灌注后,取載瘤肝臟固定脫水,OCT包埋后做連續(xù)冰凍切片,HE及DAPI染色后,在普通光鏡、熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡下觀察移植瘤組織病理特征。結果:轉染RFP基因后所得SU3-RFP細胞仍保持其干細胞特性。SU3-RFP的肝臟移植成功率為15/18(約83%)。腹腔解剖病理及活體熒光成像顯示SU3-RFP易向肝內及肝外臟器侵襲;在移植瘤冰凍切片中,表達RFP的腫瘤細胞和表達GFP的宿主細胞相互交織存在,共同參與組成腫瘤微環(huán)境;雙色熒光示蹤清晰顯示了腫瘤細胞侵襲宿主血管、遠處轉移及其與宿主細胞的融合或吞噬。結論:該模型的建立為深入研究異位移植膠質瘤微環(huán)境奠定了基礎;同時雙色熒光示蹤在異位移植瘤腫瘤組織重構中的應用對研究腫瘤細胞侵襲、轉移及其與宿主細胞相互作用等方面具有很高的實用價值。第二部分:膠質瘤干細胞可誘導宿主肝組織內膠質瘤間質細胞惡性轉化目的:在已報道的腦內原位移植的膠質瘤干細胞可誘導宿主膠質細胞發(fā)生惡性轉化的基礎上,進一步探索此類惡變的發(fā)生是否與腫瘤移植部位特異性微環(huán)境相關。方法:將轉有紅色熒光蛋白(RFP)基因的人膠質瘤干/祖細胞SU3-RFP接種于全身表達綠色熒光蛋白(GFP)的裸小鼠肝臟,致瘤后取移植瘤組織做常規(guī)病理檢測和細胞培養(yǎng),從中單克隆具永生化的GFP+細胞和GFP+/RFP+雙陽性細胞傳代,做細胞表型分析和致瘤試驗。結果:取肝內異位生長的移植瘤組織再培養(yǎng)獲得永生化的宿主鼠源間質細胞,并建立了B4、B9、B10三株高增殖性單克隆細胞株,其中B4為共表達GFP/RFP的融合細胞,還同時表達CD1a、CD83、CD86等樹突狀細胞標記蛋白;B9表達GFP和巨噬細胞標記蛋白CD68、F4/80;B10表達GFP和成纖維細胞標記蛋白FAP-α、α-SMA、S100,均為鼠源宿主細胞。3株細胞遺傳學檢測均為異倍體,在裸小鼠皮下致瘤率均為100%。結論:在裸小鼠肝組織內建立的膠質瘤干細胞異位移植模型中,膠質瘤干細胞在組織重構中可誘導其微環(huán)境中的間質細胞惡性轉化,表明這種惡性轉化在中樞神經系統(tǒng)之外亦能發(fā)生,而且間質細胞惡性轉化應為腫瘤異質性的主要原因,對進一步研究腫瘤發(fā)生、演進與腫瘤微環(huán)境的關系具有重要意義。
【關鍵詞】：膠質瘤干細胞 雙色熒光示蹤 移植瘤模型 腫瘤微環(huán)境 轉基因熒光裸小鼠 雙色熒光示蹤 膠質瘤干細胞 熒光裸小鼠 腫瘤微環(huán)境 惡性轉化
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• abstract6-10
• 序言10-13
• 參考文獻11-13
• 第一部分：雙色熒光示蹤人膠質瘤肝臟異位移植模型的建立及生物學特征13-26
• 引言13
• 材料和方法13-17
• 實驗結果17-22
• 討論22-24
• 參考文獻24-26
• 第二部分：膠質瘤干細胞可誘導宿主肝組織內膠質瘤間質細胞惡性轉化26-49
• 引言26
• 材料和方法26-34
• 結果與分析34-44
• 討論44-46
• 參考文獻46-49
• 研究小結49-50
• 綜述50-59
• 參考文獻55-59
• 中英文對照縮略詞表59-60
• 攻讀碩士學位期間公開發(fā)表的論文60-61
• 攻讀碩士學位期間參加的學術會議61-62
• 致謝62-63

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