本文關(guān)鍵詞：尼美舒利聯(lián)和絲裂霉素C對(duì)膀胱癌細(xì)胞的促凋亡的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：膀胱癌是指發(fā)生在膀胱粘膜上皮的惡性腫瘤,是泌尿系統(tǒng)常見腫瘤,其在惡性腫瘤發(fā)病率的世界排名中位居第九。其高復(fù)發(fā)和高轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特性,使患者的生存期大大縮短,嚴(yán)重威脅著人類的健康。尋找更有效的化療藥物,不僅可以提高不能手術(shù)的患者治療的有效率,同時(shí)還為應(yīng)用術(shù)后輔助治療的患者在降低復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及改善預(yù)后方面提供了更有效的解決方案。本實(shí)驗(yàn)中采用國內(nèi)外較少研究的絲裂霉素聯(lián)合尼美舒利作為研究對(duì)象,以膀胱癌EJ細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,探討該聯(lián)合用藥的有效率。絲裂霉素是從上世紀(jì)開始采用的一代化療藥物,屬抗生素類化療藥物,由鏈霉菌提取,化學(xué)結(jié)構(gòu)具有苯醌、乙酰亞胺基及氨甲酰三個(gè)活性基團(tuán),作用與烷化劑相似,與DNA鏈形成交聯(lián),抑制DNA復(fù)制,對(duì)RNA也有抑制作用,從而抑制細(xì)胞的有絲分裂過程,抗腫瘤形成。屬細(xì)胞周期非特異性藥物。主要用于各種實(shí)體腫瘤如胃癌、結(jié)腸癌、肝癌、胰腺癌、非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌和癌性胸、腹水等。其治療效果明確,是表淺性膀胱癌術(shù)灌注化療及晚期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和不能手術(shù)的膀胱癌患者全身化療的常用的化療藥物之一。尼美舒利是一種非甾體類抗炎藥,屬于環(huán)氧化酶II抑制劑。其作用機(jī)制為可以選擇性抑制環(huán)氧合酶Ⅱ,近年來相關(guān)研究表明,環(huán)氧化酶II(cyclooxygenase-2,COX-2)在惡性腫瘤細(xì)胞的生長、增殖過程中起重要作用,它可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖,抑制腫瘤細(xì)胞凋亡,促進(jìn)腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移等。例如,有研究發(fā)現(xiàn)在膀胱癌細(xì)胞中環(huán)氧化酶-2表達(dá)增高,參與腫瘤細(xì)胞的生長增殖及凋亡,同時(shí)在腫瘤組織血管生成、生物性轉(zhuǎn)移過程中有重要作用。選擇性環(huán)氧化酶-2抑制劑如塞來昔布、尼美舒利可明顯抑制膀胱癌細(xì)胞生長增殖、誘導(dǎo)凋亡、抑制新生血管和淋巴管生成等,從而抑制腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。另有研究證實(shí),在卵巢癌治療的體內(nèi)外研究中,選擇性環(huán)氧化酶-2抑制劑同樣可以通過抑制瘤體內(nèi)環(huán)氧化酶-2的表達(dá),降低VEGF的表達(dá),減少血管生成及促進(jìn)細(xì)胞凋亡發(fā)揮抗腫瘤作用。因此,針對(duì)膀胱癌中高表達(dá)的環(huán)氧化酶-2,可以選用選擇性環(huán)氧化酶-2抑制劑來治療。目的:本實(shí)驗(yàn)主要探討尼美舒利(選擇性環(huán)氧化酶-2抑制劑)聯(lián)合絲裂霉素對(duì)膀胱癌ej細(xì)胞的抑制作用。應(yīng)用以上兩種藥物體外作用于ej細(xì)胞,通過測(cè)定凋亡相關(guān)基因caspase-3/bax/bcl-2在ej細(xì)胞上的表達(dá),觀察對(duì)膀胱癌ej細(xì)胞促凋亡作用。方法:1.細(xì)胞來源:人膀胱癌ej細(xì)胞株(購自上海美軒生物科技有限公司),藥物培養(yǎng)時(shí)間分別為24h、48h、72h。2.實(shí)驗(yàn)分組:采用隨機(jī)對(duì)照原則分對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組即不做處理的細(xì)胞培養(yǎng)液作陰性對(duì)照,實(shí)驗(yàn)組按實(shí)驗(yàn)藥物不同分3組:絲裂霉素c組,濃度為2mg/l;尼美舒利組,濃度為300umol/l;絲裂霉素c(2mg/l)聯(lián)合尼美舒利組(300umol/l)。3.對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)24h,48h,72h,q-pcr法測(cè)定各干預(yù)組細(xì)胞bcl-2mrna、baxmrna及caspase3mrna表達(dá)的差異。4.對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)24h,48h,72h,westernblot法測(cè)定各干預(yù)組細(xì)胞bcl-2蛋白、bax蛋白及caspase3蛋白表達(dá)的差異。5.統(tǒng)計(jì)分析:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用spss19.0,分別用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)的數(shù)據(jù)進(jìn)行表示。多組之間的比較使用單因素析因方差分析法,兩組之間的比較使用snk法,p0.01則表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.q-pcr法測(cè)各實(shí)驗(yàn)組及空白對(duì)照組膀胱癌ej細(xì)胞中bcl-2mrna、baxmrna及caspas3mrna的表達(dá):分別作用24h、48h、72h后,與空白對(duì)照組相比,各實(shí)驗(yàn)組的bcl-2mrna的表達(dá)均降低,baxmrna及caspase3mrna均升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中與單藥組相比,聯(lián)合組的bcl-2mrna的表達(dá)最低,同時(shí)baxmrna及caspase3的表達(dá)最高(p0.01,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義);且隨作用時(shí)間的延長,聯(lián)合組中bcl-2mrna的表達(dá)逐漸降低,baxmrna及caspase3mrna的表達(dá)逐漸升高,作用72h時(shí)作用最明顯(p0.01,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。western-blot法測(cè)各實(shí)驗(yàn)組及空白對(duì)照組膀胱癌EJ細(xì)胞中Bcl-2、Bax及Caspas3蛋白的表達(dá):分別作用24h、48h、72h后,與空白對(duì)照組相比,各實(shí)驗(yàn)組的Bcl-2蛋白的表達(dá)均降低,Bax及Caspase3蛋白均升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中與單藥組相比,聯(lián)合組的Bcl-2蛋白的表達(dá)最低,同時(shí)Bax及Caspase3蛋白的表達(dá)最高(P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義);且隨作用時(shí)間的延長,聯(lián)合組中Bcl-2蛋白的表達(dá)逐漸降低,Bax及Caspase3蛋白的表達(dá)逐漸升高,作用72h時(shí)作用最明顯(P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。結(jié)論:絲裂霉素C聯(lián)合尼美舒利在抑制膀胱癌EJ細(xì)胞的生長,促進(jìn)細(xì)胞凋亡的過程中有協(xié)同作用,且隨作用時(shí)間的延長抑制作用增強(qiáng)。作用機(jī)制主要與凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax及Caspase3的表達(dá)相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：尼美舒利 絲裂霉素 環(huán)氧化酶-2抑制劑 膀胱癌EJ細(xì)胞 Bcl-2/Bax Caspase3
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.14
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 英文縮寫12-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-26
• 結(jié)果26-28
• 附圖28-31
• 附表31-34
• 討論34-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 綜述44-50
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 致謝50-51
• 個(gè)人簡歷51

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本文編號(hào)：500591