本文關(guān)鍵詞：CCNG2在人甲狀腺乳頭狀癌K1細胞中的表達及其對K1細胞增殖凋亡影響的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:細胞周期蛋白G2(Cyclin G2,CCNG2)是細胞周期蛋白家族中發(fā)現(xiàn)較晚的一員。近年來對其的研究發(fā)現(xiàn),CCNG2具有抑制細胞增殖、促進凋亡,負性調(diào)控腫瘤細胞增殖的作用。本研究旨在探討CCNG2基因在甲狀腺乳頭狀癌K1細胞中的表達情況及其對K1細胞增殖、凋亡的影響,并期望通過實驗了解CCNG2基因在上述過程中可能的作用機制,為以CCNG2為靶點的甲狀腺乳頭狀癌治療提供實驗依據(jù)。方法:1構(gòu)建載有CCNG2基因的質(zhì)粒p EGFP-N1-CCNG2,優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件后轉(zhuǎn)染體外甲狀腺乳頭狀癌K1細胞,Western blot法檢測轉(zhuǎn)染結(jié)果。2 MTT、流式細胞術(shù)分別檢測空白對照組、陰性對照組、實驗組K1細胞增殖、凋亡情況。Western blot法、免疫細胞化學(xué)染色法檢測CCNG2、p53、mdm2蛋白表達情況。3上述實驗均重復(fù)3次或以上,結(jié)果以均數(shù)±標準差(x±S)表示。計量資料行正態(tài)性檢驗及方差齊性檢驗后采用方差分析,多組數(shù)據(jù)兩兩比較采用LSD-t檢驗。所有實驗數(shù)據(jù)均用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理,P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化及檢測:不同比例DNA與轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine2000混合后轉(zhuǎn)染細胞,各組轉(zhuǎn)染效率有差異,其中DNA(ug):Lipofectamine2000(ul)為1:5時轉(zhuǎn)染效率最高,達(77.33±3.79)%(P0.05);不同細胞融合度時接受轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染效率有差異,以細胞融合度達50~60%時轉(zhuǎn)染效率最佳,為(90.33±1.53)%(P0.05)。2 MTT檢測細胞增殖結(jié)果:分別于轉(zhuǎn)染24h、48h、72h、96h行MTT檢測,與對照組比較實驗組各時間點均出現(xiàn)生長抑制,并于轉(zhuǎn)染72小時抑制效應(yīng)最明顯達35.40%(P0.05),空白對照組與陰性對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3 FCM檢測細胞凋亡結(jié)果:轉(zhuǎn)染48小時后,實驗組較空白對照組、陰性對照組早期凋亡率明顯升高[(5.48±0.35)%vs(1.06±0.05)%、(1.12±0.09)%](P0.05);實驗組較空白對照組、陰性對照組晚期凋亡率顯著升高[(9.90±0.94)%vs(2.65±0.20)%、(1.58±0.28)%](P0.05),空白對照組與陰性對照組比較,細胞早期、晚期凋亡率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4 Western Blot檢測結(jié)果:轉(zhuǎn)染48小時后,實驗組CCNG2蛋白相對表達量較空白對照組、陰性對照組顯著升高(0.72±0.053 vs 0.36±0.032、0.37±0.040)(P0.05),而兩對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。轉(zhuǎn)染48小時后,實驗組與對照組相比,p53、mdm2蛋白表達水平明顯上調(diào)(P0.05),空白對照組與陰性對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。分別轉(zhuǎn)染p EGFP-N1-CCNG2 24h、48h、72h,CCNG2蛋白表達持續(xù)增加,p53、mdm2蛋白表達水平上調(diào)且與CCNG2表達趨勢具有一致性。5免疫細胞化學(xué)染色法結(jié)果:轉(zhuǎn)染p EGFP-N1-CCNG2 48h后實驗組CCNG2、p53、mdm2蛋白表達陽性水平明顯高于對照組。結(jié)論:1體外實驗顯示,瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)使CCNG2基因在甲狀腺乳頭狀癌K1細胞產(chǎn)生過表達并具有抑制細胞增殖,促進細胞凋亡的作用。2轉(zhuǎn)染CCNG2基因后CCNG2、p53蛋白表達上調(diào),推測CCNG2通過上調(diào)p53蛋白表達水平起到抑制細胞增殖、促進細胞凋亡的作用。3轉(zhuǎn)染CCNG2基因后mdm2蛋白表達上調(diào),推測這種現(xiàn)象可能為過量的p53蛋白所致,同時可能存在CCNG2對mdm2作用的其他途徑,對mdm2上調(diào)的原因及其與CCNG2之間的關(guān)系做深入研究將有助于進一步了解CCNG2腫瘤負性調(diào)控作用機制。
【關(guān)鍵詞】：CCNG2 甲狀腺乳頭狀癌 增殖 凋亡 p53 mdm2
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R736.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 英文縮寫8-9
• 前言9-10
• 材料與方法10-20
• 結(jié)果20-23
• 附圖23-32
• 討論32-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻37-41
• 綜述CCNG2 及其對腫瘤影響的研究進展41-48
• 參考文獻45-48
• 致謝48-49
• 個人簡歷49

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陜光;陜聲國;張孝斌;劉修恒;;細胞周期素G_1和G_2在膀胱癌中的表達及臨床意義[J];中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志;2009年03期

  本文關(guān)鍵詞：CCNG2在人甲狀腺乳頭狀癌K1細胞中的表達及其對K1細胞增殖凋亡影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：500261