本文關鍵詞：基于離心芯片的血清中癌胚抗原的含量檢測，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：癌胚抗原是廣泛存在于消化系統癌、乳腺癌、肺癌患者血清中的一種糖蛋白。它是一種廣譜性的腫瘤標志物,是目前臨床上公認的、具有明確診斷意義的六種腫瘤標志物之一,對血清中癌胚抗原濃度的實時監(jiān)測,能夠更好地監(jiān)測病情發(fā)展以及對藥物療效進行判斷。傳統的癌胚抗原的檢測方法是免疫,多次洗滌分離操作繁瑣、費時。本文以離心沉降為原理,首次將殼聚糖作為密度介質,開發(fā)了一種一步檢測癌胚抗原的方法,即在預儲存有密度介質的14個鉛筆型通道的圓盤芯片上,一步離心將待測微珠復合物與溶液分離后,直接進行熒光檢測,實現了癌胚抗原高通量的快速、便捷檢測。文中首先對用微珠代替常規(guī)的孔板固相基底的可行性進行了驗證。對percoll、右旋糖酐以及殼聚糖三種密度介質的分離效果進行考察,發(fā)現2%的殼聚糖溶液的分離效果明顯較其他兩種的好。接著對不同傾斜角的芯片通道進行篩選,最終選擇0°傾斜角的通道進行實驗。對于離心所涉及的離心轉速、離心時間等參數,文中進行了優(yōu)化,最終在2500r/min的轉速條件下進行2.5min的離心,使待測微珠復合物與溶液完全分離。用所開發(fā)的方法對癌胚抗原標準品濃度進行測定,得到癌胚抗原濃度與熒光強度關系的標準曲線,在0.7-22.5ng/mL濃度范圍內線性良好(R2=0.993)。最后對32例已知濃度的癌胚抗原血清樣品進行檢測,并與實際濃度進行比較,發(fā)現本實驗所用方法得到的檢測結果與醫(yī)院所提供結果無顯著性差異,因此本文建立的實驗方法在臨床生物標記物檢測方面具有潛在應用價值。
【關鍵詞】：離心芯片 癌胚抗原 密度介質 熒光檢測
【學位授予單位】：大連理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.43
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 引言8-9
• 1 文獻綜述9-25
• 1.1 癌胚抗原9-11
• 1.1.1 癌胚抗原簡介9
• 1.1.2 癌胚抗原檢測現狀9-11
• 1.2 離心微流控11-21
• 1.2.1 離心微流控芯片的制作11-13
• 1.2.2 離心芯片的原理及優(yōu)點13
• 1.2.3 離心芯片的應用及發(fā)展13-21
• 1.3 密度梯度離心21
• 1.4 殼聚糖21-24
• 1.4.1 殼聚糖的理化性質21-22
• 1.4.2 殼聚糖的應用22-24
• 1.5 研究目標24-25
• 2 實驗25-35
• 2.1 實驗試劑25-26
• 2.2 實驗儀器26-27
• 2.3 離心芯片的設計及制作27-29
• 2.3.1 模板的制作27-28
• 2.3.2 PDMS-玻璃芯片的制作28-29
• 2.4 癌胚抗原的檢測29-35
• 2.4.1 實驗原理29-30
• 2.4.2 實驗方法的建立30
• 2.4.3 實驗可行性驗證30-31
• 2.4.4 微珠表面抗體結合率的測定31
• 2.4.5 芯片通道平行性驗證31-32
• 2.4.6 實驗條件的篩選及優(yōu)化32-33
• 2.4.7 癌胚抗原標準品的檢測33-34
• 2.4.8 人血清中癌胚抗原的檢測34-35
• 3 結果與討論35-48
• 3.1 實驗方法可行性驗證35-36
• 3.2 芯片通道平行性驗證36
• 3.3 微珠表面蛋白結合率36-37
• 3.4 實驗條件的篩選及優(yōu)化37-41
• 3.4.1 密度介質的篩選37-39
• 3.4.2 通道傾斜角度的優(yōu)化39
• 3.4.3 離心轉速的優(yōu)化39-40
• 3.4.4 離心時間的優(yōu)化40-41
• 3.5 癌胚抗原標準品的含量測定41-42
• 3.6 人血清中癌胚抗原含量的測定42-48
• 結論48-49
• 參考文獻49-54
• 致謝54-55

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本文編號：500219