本文關(guān)鍵詞：ANG通過HMGA2調(diào)控肺鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞遷移、侵襲功能機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:作為一種惡性腫瘤,肺癌在全球范圍內(nèi)的死亡率高居第一,雖然近年來針對其的診治方法已取得了長足的進(jìn)展,但是其預(yù)后仍不甚理想。而降低肺癌細(xì)胞細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力仍是降低肺癌發(fā)病率及致死率的重要一環(huán)。而肺鱗癌作為肺癌的第二大病理分型,占全部病理分型的40%。血管生成素(ANG)作為血管核糖核酸酶RNase A家族的一員,在多種腫瘤細(xì)胞中高表達(dá),它具有33%的氨基酸成分及56%的RNase-A同源性。ANG被認(rèn)為在腫瘤血管生成的過程中起著關(guān)鍵的作用。而近些年的研究發(fā)現(xiàn),ANG可以直接刺激rRNA的轉(zhuǎn)錄從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖,并與腫瘤的預(yù)后不良具有一定的相關(guān)性。ANG還可以裂解tRNA來影響腫瘤細(xì)胞中的各種反應(yīng),包括細(xì)胞的增殖、浸潤以及細(xì)胞核中管道的形成等,而在正常的非內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞核中,ANG卻鮮有表達(dá)。高遷移率族蛋白-2(HMGA2)被報道參與了多種生物學(xué)發(fā)展過程,包括胚胎的形成及腫瘤的發(fā)展。因為它可以通過改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)來調(diào)節(jié)多種靶基因的表達(dá),HMGA2常被稱為是”建筑轉(zhuǎn)錄因子”。他被報道與多種惡性腫瘤的不良預(yù)后具有相關(guān)性�；诖�,本研究擬探究ANG-HMGA2通路對肺鱗癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力的影響,并探討其可能的作用機制。并為今后ANG介導(dǎo)的相關(guān)靶向治療提供科學(xué)的依據(jù)。方法:本研究分為以下三個部分:1、檢測肺鱗癌組織和正常癌旁組織中ANG和HMGA的表達(dá):收集肺鱗癌患者的腫瘤病灶組織與患者癌旁正常的肺組織,利用RT-PCR、Western Blot及免疫組織化學(xué)實驗技術(shù)在mRNA及蛋白水平檢測ANG及HMGA2在正常肺組織與肺鱗癌組織中的表達(dá)有無差異,利用免疫組織化學(xué)染色實驗對比正常癌旁肺組織標(biāo)本和肺鱗癌腫瘤組織標(biāo)本中ANG及HMGA2表達(dá)情況。2、ANG及HMGA2在肺鱗癌細(xì)胞中表達(dá)的關(guān)聯(lián)性及對肺鱗癌細(xì)胞功能的影響:培養(yǎng)人肺鱗癌細(xì)胞株SK-MES-1,并構(gòu)建包有ANG及干擾ANG的RNA腺病毒。用Ad-ANG及ShHMGA2轉(zhuǎn)染細(xì)胞株SK-MES-1,以Ad-GFP及shScramble作為轉(zhuǎn)染對照,采用RT-PCR及Western Blot技術(shù)分別對比過表達(dá)及沉默ANG后HMGA2的表達(dá)差異。對比過表達(dá)及沉默HMGA2后SK-MES-1的增殖、遷移及侵襲等功能學(xué)改變。3、ANG直接調(diào)控HMGA2表達(dá)的機制研究:培養(yǎng)培養(yǎng)人肺鱗癌細(xì)胞株SK-MES-1,構(gòu)建Ad-ANG及shHMGA2,轉(zhuǎn)染SK-MES-1,以同種細(xì)胞株轉(zhuǎn)染Ad-GFP及shScramble作對照,驗證過表達(dá)ANG但沉默HMGA2后兩組細(xì)胞間遷移、侵襲及增殖等功能的差異。然后采用染色體免疫共沉淀方法(CHIP)技術(shù)驗證HMGA2是否結(jié)合在ANG啟動子區(qū)。結(jié)果:1、通過qPCR在12對肺鱗癌及癌旁組織對ANG和HMGA2進(jìn)行mRNA層面的檢測,我們得出肺鱗癌組織中的ANG及HMGA2的mRNA表達(dá)相對于對照組明顯升高(P0.05),同樣的趨勢也出現(xiàn)在Western Blot及免疫組化中。2、在細(xì)胞層面上,我們對肺鱗癌細(xì)胞系SK-MES-1轉(zhuǎn)染了包有ANG的腺病毒,分別在mRNA水平及Western Blot水平驗證轉(zhuǎn)染效率后,隨后利用RT-PCR檢測實驗和對照組的ANG及HMGA2的mRNA的量,結(jié)果示,實驗組HMGA2mRNA表達(dá)水平高于對照組(P0.05)。而肺鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系SK-MES-1中轉(zhuǎn)染Ad-ANG后行Transwell遷移及侵襲試驗后遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)經(jīng)高倍顯微鏡計數(shù)后與對照組相比具有顯著增多(*P0.05)。而轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞系在CCK8增殖實驗在450nm處的OD值與對照組相比其具有顯著差異(*P0.05)。3、在共轉(zhuǎn)染Ad-ANG及shHMGA2后,經(jīng)PCR和Western Blot實驗檢測,HMGA2在mRNA和蛋白層面的表達(dá)相對于對照組差異明顯。Transwell遷移及侵襲試驗結(jié)果示在HMGA2干擾組中,高倍鏡下觀察,透膜遷移及侵襲的細(xì)胞明顯減少。CCK8細(xì)胞增殖試驗示HMGA2干擾組的細(xì)胞相對于對照組在OD450的吸光值明顯降低。接下來,染色體免疫共沉淀結(jié)果示ANG確實與HMGA2啟動子序列有結(jié)合。結(jié)論:ANG及其潛在下游調(diào)控蛋白HMGA2在肺鱗狀細(xì)胞癌組織中高表達(dá),過表達(dá)了ANG后,HMGA2在mRNA層面及蛋白層面均顯著提高,且細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力均有顯著提高。同樣過表達(dá)ANG,HMGA2抑制組細(xì)胞的增殖、遷移及增殖功能明顯降低,這進(jìn)一步證實了ANG與HMGA2在肺鱗癌細(xì)胞中的關(guān)聯(lián)。最后,我們用染色體免疫共沉淀的實驗方法證實ANG是結(jié)合于HMGA2啟動子序列,表明ANG對HMGA2的直接調(diào)控作用。
【關(guān)鍵詞】：血管生成素 肺鱗狀細(xì)胞癌 高遷移率族蛋白A-2
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 縮略詞表11-12
• 前言12-16
• 參考文獻(xiàn)14-16
• 第一部分 檢測肺鱗癌組織和正常癌旁組織中ANG和HMGA2的表達(dá)16-29
• 一、材料和方法16-25
• 二、結(jié)果25-27
• 三、討論27-28
• 參考文獻(xiàn)28-29
• 第二部分 ANG及HMGA2的表達(dá)在肺鱗癌細(xì)胞中的聯(lián)系及對其功能學(xué)的影響29-40
• 一、材料29-31
• 二、方法31-34
• 三、結(jié)果34-38
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 第三部分 ANG通過調(diào)控HMGA2誘導(dǎo)肺鱗癌細(xì)胞侵襲遷移的機制研究40-50
• 一、材料和方法40-45
• 二、結(jié)果與討論45-48
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 全文總結(jié)50-52
• 綜述 肺癌中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展52-67
• 參考文獻(xiàn)60-67
• 在讀期間發(fā)表論文和參加科研工作情況67-68
• 致謝68

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