本文關(guān)鍵詞：EZH2在神經(jīng)母細胞瘤中的表達及其相關(guān)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的:神經(jīng)母細胞瘤(neuroblastoma,NB)是兒童最常見的顱外實體瘤,目前國內(nèi)對早期、低危NB已取得較好的治療效果,但晚期NB,雖然結(jié)合運用了手術(shù)、大劑量化療、放療及自體干細胞移植等手段,患兒五年生存率仍維持在50%左右,單純地加大手術(shù)、放化療強度已經(jīng)很難有效提高患兒的治療效果,未來的治療方向應(yīng)該是更加特異性、敏感性的治療手段—分子靶向治療。因此,尋求新而有效的潛在NB分子靶點具有重要意義。EZH2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)蛋白是多梳抑制復(fù)合物2(polycomb repressor complex 2,PRC2)的核心催化元件,通過促使組蛋白H3甲基化對靶基因的轉(zhuǎn)錄起調(diào)控作用。研究顯示,EZH2高表達是多種癌病預(yù)后不良的因素,在NB中,同樣發(fā)現(xiàn)EZH2在表觀遺傳上沉默NB抑癌基因CASZ1、CLU、RUNX3和NGFR,提示EZH2可做為NB分子靶向的潛位點。本課題的研究目的在于檢測EZH2蛋白在NB組織水平中的表達情況,并結(jié)合臨床資料分析其表達水平與NB患兒臨床病理因素和生存預(yù)后的關(guān)系,然后在NB細胞系中穩(wěn)定過表達和降表達EZH2,進一步研究EZH2對NB發(fā)生發(fā)展的作用機制。研究方法和主要結(jié)果:1.EZH2在神經(jīng)母細胞瘤組織中的蛋白表達情況方法:利用免疫組化的方法檢測74例NB組織中EZH2的表達情況。結(jié)果:74例患兒中陰性表達EZH2 2例,弱陽性表達EZH2 21例,陽性表達EZH231例,強陽性表達EZH2 20例,即EZH2弱表達23例,強表達51例。2.EZH2表達與NB患兒臨床病理特點及生存預(yù)后分析方法:利用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析EZH2表達情況與NB患兒臨床病理因素之間和患兒生存預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果:經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析,EZH2強表達與患兒腫瘤高分期(X2=6.931,P=0.008)、腫瘤伴有遠處轉(zhuǎn)移(X2=5.722,P=0.017)及Ki67強表達(X2=29.827,P=0.000)正相關(guān),與短期治療效果達VGPR以上呈一定的負相關(guān),P值接近0.05(X2=4.045,P=0.052)。分析EZH2表達與患兒治療后復(fù)發(fā)情況提示,EZH2強表達與患兒復(fù)發(fā)存在一定的相關(guān)性,但P值大于0.05(X2=2.699,P=0.100)。而EZH2表達情況與患兒年齡、性別、原發(fā)部位及病理類型未見明顯相關(guān)性(P0.05)。3.構(gòu)建穩(wěn)定過表達和降表達EZH2的NB細胞系,并分析其對NB細胞生物學(xué)行為的影響方法:通過構(gòu)建過表達EZH2和小RNA干擾下調(diào)EZH2的慢病毒表達質(zhì)粒的方法,建立穩(wěn)定過表達和降表達EZH2的NB細胞系,并利用MTT、Edu增殖實驗和Transwell等方法研究EZH2對NB細胞的生長增殖和遷移的影響。結(jié)果:(1)成功建立穩(wěn)定過表達EZH2的NB細胞系SK-N-BE(2)-EZH2-COPGFP和降表達EZH2的NB細胞系SK-N-BE(2)-sh EZH2-74、SK-N-BE(2)-sh EZH2-77,并Western Blotting驗證;(2)在SK-N-BE(2)細胞中穩(wěn)定過表達EZH2后,細胞增殖能力和遷移能力均較對照和空白組增強;(3)在SK-N-BE(2)細胞中利用小RNA干擾下調(diào)EZH2表達后,細胞增殖能力和遷移能力均較對照和空白組明顯減弱。4.EZH2在NB誘導(dǎo)分化中的作用影響方法:利用反式維甲酸(Retinoic Acid,RA)和5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-Bromodeoxyuridine,Brdu)誘導(dǎo)NB細胞系分化后,研究EZH2對NB誘導(dǎo)分化的作用影響。結(jié)果:(1)經(jīng)RA誘導(dǎo)刺激后,SK-N-BE(2)細胞出現(xiàn)明顯的神經(jīng)分化,神經(jīng)軸突絲明顯,相互交錯,胞體變小,細胞胞體之間聚集,囊泡分泌增多,呈神經(jīng)節(jié)樣生長,細胞生長速度明顯變慢;(2)經(jīng)Brdu誘導(dǎo)刺激后,SK-N-BE(2)細胞形態(tài)學(xué)未發(fā)生明顯變化,但扁平寬大細胞(類似基質(zhì)細胞)成份略增多,細胞生長速度未見明顯差異;(3)經(jīng)RA刺激后,EZH2、CD133和Vimentin蛋白均明顯減少,而Brdu誘導(dǎo)后EZH2和Vimentin蛋白表達增多,而CD133蛋白變化不明顯。結(jié)論:1.EZH2在高分期、伴有遠處轉(zhuǎn)移的NB患兒組織中高表達,與Ki-67表達成顯著正相關(guān)性,并與患兒預(yù)后負相關(guān),提示EZH2是NB的一個促癌因素;2.細胞功能實驗顯示,EZH2促進SK-N-BE(2)細胞的生長增殖和遷移;3.RA和Brdu誘導(dǎo)刺激SK-N-BE(2)后,EZH2蛋白表達發(fā)生明顯變化,提示其可能參與NB的腫瘤干細胞維持和誘導(dǎo)分化。
【關(guān)鍵詞】：EZH2 神經(jīng)母細胞瘤 靶向治療 分化 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 對象和方法15-32
• 1.1 實驗材料15-21
• 1.1.1 細胞系15
• 1.1.2 病理切片標本及臨床資料收集15
• 1.1.3 質(zhì)粒15
• 1.1.4 常規(guī)試劑和耗材15-16
• 1.1.5 各實驗所需主要抗體16
• 1.1.6 各實驗所需主要試劑配制16-21
• 1.2 主要實驗儀器21
• 1.3 主要實驗方法21-31
• 1.3.1 免疫組化和表達情況評分21-22
• 1.3.2 免疫組織化學(xué)染色評價方法22
• 1.3.3 質(zhì)粒構(gòu)建、提取及鑒定方法22-24
• 1.3.4 細胞培養(yǎng)及傳代24-25
• 1.3.5 細胞凍存25
• 1.3.6 細胞復(fù)蘇25-26
• 1.3.7 鈣法轉(zhuǎn)染制備慢病毒26
• 1.3.8 慢病毒感染細胞26-27
• 1.3.9 提取細胞全蛋白27
• 1.3.10 Western Blotting27-28
• 1.3.11 Transwell體外遷移實驗（Transwell assay）28-29
• 1.3.12 Edu細胞增殖實驗29-30
• 1.3.13 細胞生長曲線（MTT）實驗30
• 1.3.14 RA和Brdu誘導(dǎo)刺激30-31
• 1.4.病例隨訪及統(tǒng)計學(xué)方法31-32
• 1.4.1 病例隨訪31
• 1.4.2 統(tǒng)計學(xué)方法31-32
• 結(jié)果32-44
• 2.1 EZH2蛋白表達情況與NB臨床病理指標之間的關(guān)系32-35
• 2.2 EZH2蛋白表達情況與NB臨床預(yù)后之間的關(guān)系35-37
• 2.3 EZH2過表達及shEZH2慢病毒質(zhì)粒的成功構(gòu)建37-38
• 2.4 穩(wěn)定過表達和降表達EZH2的NB細胞系(SK-N-BE(2)-EZH2-COPGFP、SK-N-BE(2)-shEZH2-74和SK-N-BE(2)-shEZH2-77)的成功建立38-39
• 2.5 穩(wěn)定過表達和降表達EZH2后對NB細胞生長增殖和遷移能力的影響39-41
• 2.6 反式維甲酸和Brdu誘導(dǎo)NB細胞分化后，，EZH2蛋白表達水平發(fā)生變化41-44
• 討論44-47
• 3.1 EZH2強表達是NB的促癌因素，有望成為未來NB的靶向位點44-45
• 3.2 EZH2可能參與NB的誘導(dǎo)分化調(diào)控45
• 3.3 EZH2可能參與NB腫瘤干細胞的干性維持45-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-51
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明51-52
• 綜述 外周神經(jīng)母細胞性腫瘤分化及去分化的相關(guān)研究進展52-65
• 綜述參考文獻59-65
• 致謝65-67
• 個人簡歷67

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙敏,許新俗;神經(jīng)母細胞瘤1例報告[J];中國綜合臨床;2000年07期

2 高解春;提高我國神經(jīng)母細胞瘤的研究與診治水平[J];中華小兒外科雜志;2000年03期

3 李昭鑄,江啟俊,韓福友,毛富祥,陶文芳,張旗濤;影響神經(jīng)母細胞瘤手術(shù)療效因素的探討[J];中華小兒外科雜志;2000年03期

4 ;神經(jīng)母細胞瘤的分子生物學(xué)特點[J];中華小兒外科雜志;2000年03期

5 ;血管內(nèi)皮生長因子及其受體在神經(jīng)母細胞瘤中的表達[J];中華小兒外科雜志;2000年03期

6 寧立華,馬春艷;小兒神經(jīng)母細胞瘤誤診4例[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2000年03期

7 劉戰(zhàn)云,鄒燕;神經(jīng)母細胞瘤10例臨床分析[J];河北醫(yī)藥;2000年10期

8 王彥斌;先天性神經(jīng)母細胞瘤一例[J];河南腫瘤學(xué)雜志;2000年06期

9 田廣燕,徐傳偉;小兒神經(jīng)母細胞瘤13例臨床分析[J];腫瘤防治雜志;2000年04期

10 沈乃霞,王靜,王薇,吳敏;小兒神經(jīng)母細胞瘤15例分析[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2000年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 杝志峰;;治vB神經(jīng)母細胞瘤的近況和發(fā)展[A];第八屆全國兒童腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

2 李杰;;不同強度化療方案對Ⅳ期神經(jīng)母細胞瘤患兒的治療價值[A];第八屆全國兒童腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

3 劉洲祿;陳迪祥;肖元宏;王政;蘇剛;劉貴麟;;67例神經(jīng)母細胞瘤外科手術(shù)方法體會[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國小兒外科學(xué)術(shù)會論文集[C];2010年

4 王煥民;;神經(jīng)母細胞瘤的休眠和自然退化[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國小兒外科學(xué)術(shù)會論文集[C];2010年

5 張曉倫;劉菁;包楠;;晚期神經(jīng)母細胞瘤的綜合治療[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國小兒外科學(xué)術(shù)會論文集[C];2010年

6 徐斐燕;鄒韌;沈愛蓮;;小兒神經(jīng)母細胞瘤超聲誤診分析[A];中西醫(yī)結(jié)合第九次全國兒科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2000年

7 劉鈞澄;李桂生;劉唐彬;李穗生;謝家倫;劉文旭;;33例神經(jīng)母細胞瘤的療效分析[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集[C];2000年

8 王新紅;;小兒神經(jīng)母細胞瘤誤診13例探討[A];中華醫(yī)學(xué)會第三次全國兒科基層醫(yī)師學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

9 楊昆;李強;趙亞寧;;小兒神經(jīng)母細胞瘤51例臨床分析[A];第八屆全國兒童腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

10 金惠明;;有脊髓壓迫的嬰幼兒神經(jīng)母細胞瘤治療的挑戰(zhàn)與困惑[A];第八屆全國兒童腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 孟剛;早期診斷神經(jīng)母細胞瘤至關(guān)重要[N];中國消費者報;2007年

2 葛素紅;我國首次完成——神經(jīng)母細胞瘤細胞原代培養(yǎng)[N];中國醫(yī)藥報;2002年

3 姚春雨 錢勇;解放軍總醫(yī)院開辟神經(jīng)母細胞瘤治療新途徑[N];中國醫(yī)藥報;2002年

4 介生;血管生成抑制劑的表達可抑制神經(jīng)母細胞瘤生長[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2001年

5 風(fēng)信;補充足夠維生素子女少患癌[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

6 天津市腫瘤醫(yī)院兒童腫瘤科主任 閆杰李運紅 胡顏整理;兒童惡性實體腫瘤有五最[N];健康報;2009年

7 王保健;父母不可忽視兒童腫瘤[N];人民日報海外版;2001年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳凱;miR-483-3p對人神經(jīng)母細胞瘤增殖、凋亡、侵襲及遷移的影響及作用機制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

2 田培超;靶向MYCN干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建及聯(lián)合TAE684對神經(jīng)母細胞瘤生物學(xué)行為的影響[D];鄭州大學(xué);2014年

3 支運來;NF-κB信號通路介導(dǎo)的神經(jīng)母細胞瘤增殖及侵襲、轉(zhuǎn)移的實驗研究[D];青島大學(xué);2015年

4 于芳;應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選神經(jīng)母細胞瘤自行消退相關(guān)蛋白[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2010年

5 鄭繼翠;環(huán)境內(nèi)分泌干擾物對神經(jīng)母細胞瘤生長的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

6 劉海燕;Astrocyte elevated Gene-1在神經(jīng)母細胞瘤中的表達及基因沉默對細胞生物學(xué)行為的影響[D];山東大學(xué);2009年

7 蔡煒嵩;伊立替康聯(lián)合環(huán)磷酰胺節(jié)律性化療治療神經(jīng)母細胞瘤療效及機制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2009年

8 鹿洪亭;神經(jīng)母細胞瘤裸鼠模型建立及miRNAs與神經(jīng)母細胞瘤轉(zhuǎn)移機制研究[D];青島大學(xué);2010年

9 彭鯤鵬;維甲酸誘導(dǎo)神經(jīng)母細胞瘤分化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

10 談衛(wèi)強;青蒿素抑制神經(jīng)母細胞瘤細胞增殖的機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉娜;神經(jīng)母細胞瘤36例臨床分析[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

2 高喜偉;神經(jīng)母細胞瘤38例臨床分析[D];鄭州大學(xué);2012年

3 王朝林;神經(jīng)母細胞瘤中DKK3基因啟動子甲基化及其表達失活的研究[D];鄭州大學(xué);2015年

4 沈玉平;GRP78蛋白的表達與神經(jīng)母細胞瘤生物學(xué)行為相關(guān)性分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

5 李永春;“氣一元論”論治神經(jīng)母細胞瘤的理論探討及療效觀察[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

6 魏嬋娟;ALK、ROS1蛋白在神經(jīng)母細胞瘤中的表達及臨床意義[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

7 楊婷;156例神經(jīng)母細胞瘤的臨床回顧性分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

8 李吉馥;組蛋白賴氨酸甲基化轉(zhuǎn)移酶SETDB1及其下游因子對神經(jīng)母細胞瘤增殖分化的影響及機制研究[D];西南大學(xué);2016年

9 張維博;組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SMYD3調(diào)控神經(jīng)母細胞瘤增殖的研究[D];西南大學(xué);2016年

10 蔡在欣;從厥陰、中氣治療神經(jīng)母細胞瘤化療不良反應(yīng)的臨床研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：EZH2在神經(jīng)母細胞瘤中的表達及其相關(guān)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：487279