本文關鍵詞：BMP4對肝癌VM形成影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【研究目的】腫瘤血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry,VM)是一種管壁由腫瘤細胞圍成的、不依賴機體內皮細胞的腫瘤微循環(huán)模式。VM與腫瘤的浸潤和轉移、臨床分期、不良預后有關。BMP4是TGF-β超家族中的一員,研究發(fā)現(xiàn)BMP4在促進腫瘤細胞遷移侵襲過程中發(fā)揮重要作用。本研究通過探討B(tài)MP4在肝癌VM形成中發(fā)揮的作用,期待能為肝細胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的治療提供新的的思路和靶點�！狙芯糠椒ā�1、收集天津醫(yī)科大學總醫(yī)院和腫瘤醫(yī)院經手術切除且隨訪資料完整并經病理診斷為肝細胞肝癌的病例標本92例,利用免疫組化方法,將病例分為BMP4陽性組和BMP4陰性組,分析BMP4與VM、年齡、性別、腫瘤大小、病理分級、臨床分期、轉移之間的關系;用Kaplan-Meier生存分析比較BMP4陽性組與BMP4陰性組患者的生存預后情況。2、根據(jù)BMP4的表達水平,選取低表達BMP4的HCC細胞系HepG2細胞和高表達BMP4的HCC細胞系SMMC7721細胞。HepG2細胞轉染BMP4上調質粒構建BMP4上調模型,SMMC7721細胞轉染BMP4下調質粒構建BMP4下調模型。利用Western Blot及細胞免疫熒光鑒定BMP4轉染效果。3、利用劃痕和侵襲實驗評價上調BMP4對HepG2細胞遷移侵襲能力變化;下調BMP4對SMMC7721細胞遷移侵襲能力變化。4、利用三維培養(yǎng)分析上調BMP4對HepG2細胞管狀結構形成能力的影響;下調BMP4對SMMC7721細胞管狀結構形成能力的影響。5、利用Western Blot及細胞免疫熒光實驗檢測上調BMP4對HepG2細胞中EMT相關蛋白(E-cadherin、Vimentin)、干細胞相關分子(OCT4、SOX2)表達的影響;下調BMP4對SMMC7721細胞中EMT相關蛋白(E-cadherin、Vimentin)、干細胞相關分子(OCT4、SOX2)表達的影響。6、利用Western Blot及細胞免疫熒光實驗檢測上調BMP4對HepG2細胞VM相關蛋白EphA2、VE-cadherin及MMP2表達的影響;下調BMP4對SMMC7721細胞VM相關蛋白EphA2、VE-cadherin及MMP2表達的影響。7、利用明膠酶譜實驗檢測上調BMP4對HepG2細胞中MMP2表達活性的影響;下調bmp4對smmc7721細胞中mmp2表達活性的影響�！狙芯拷Y果】1、免疫組化染色結果顯示,在92例肝癌標本中,52例呈bmp4陽性表達,40例呈bmp4陰性表達。分析bmp4陽性組和bmp4陰性組與肝癌患者臨床病理資料的關系顯示,bmp4與vm呈正相關(χ2=5.662,p=0.017)。bmp4在年齡45歲的患者中表達較高,而在≤45歲的患者中表達較低(χ2=8.400,p=0.004)。bmp4在不同病理分級的患者中表達不同,bmp4在低分化(Ⅲ~Ⅳ)的患者中表達高于高分化(Ⅰ~Ⅱ)的患者(χ2=4.048,p=0.044)。bmp4在不同臨床分期的患者中表達也不同,在Ⅲ~Ⅳ期的患者中的表達較Ⅰ~Ⅱ期的患者表達高(χ2=5.475,p=0.019)。bmp4在不同性別、腫瘤大小、有無轉移的患者中的差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。kaplan-meier生存分析結果顯示,bmp4陽性組較bmp4陰性組患者的生存時間短(p=0.046)。2、westernblot及細胞免疫熒光實驗顯示轉染bmp4上調質粒后hepg2細胞bmp4表達明顯上調,轉染bmp4下調質粒后smmc7721細胞bmp4表達明顯下調。3、劃痕和侵襲實驗結果顯示,上調bmp4后,hepg2細胞遷移侵襲能力明顯提高(p0.05);下調bmp4后,smmc7721細胞遷移侵襲能力明顯降低(p0.05)。4、三維培養(yǎng)結果顯示,上調bmp4后,hepg2細胞形成管狀結構的能力明顯增強;下調bmp4后,smmc7721細胞形成管狀結構的能力明顯降低。5、westernblot及細胞免疫熒光實驗結果顯示,上調bmp4后,hepg2細胞中emt相關蛋白vimentin表達增強,e-cadherin表達降低,干細胞相關分子oct4、sox2表達增強;下調bmp4后,smmc7721細胞中emt相關蛋白vimentin表達降低,e-cadherin表達增強,干細胞相關分子oct4、sox2表達降低。6、westernblot及細胞免疫熒光實驗結果顯示,上調bmp4后,hepg2細胞vm相關蛋白epha2、ve-cadherin、mmp2表達增強;下調bmp4后,smmc7721細胞vm相關蛋白epha2、ve-cadherin、mmp2表達降低。7、明膠酶譜實驗檢結果顯示,上調bmp4后,hepg2細胞mmp2表達活性增強;下調bmp4后,smmc7721細胞mmp2表達活性降低。【研究結論】1、BMP4與肝癌的VM、年齡、病理分級、臨床分期呈正相關,與其它臨床病理資料無關,并且BMP4表達陽性的患者生存時間短,預后不良。2、BMP4可以增強HCC細胞的遷移、侵襲能力和VM形成能力,它可能是通過誘導HCC細胞發(fā)生EMT、獲得某些干性特點及EphA2/VE-cadherin/MMP2通路來促進肝癌VM形成。本研究可能為肝癌的抗血管治療提供了新的作用靶點。
【關鍵詞】：BMP4 肝細胞肝癌 血管生成擬態(tài) 上皮—間充質轉化 干性
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 縮略語12-13
• 前言13-17
• 研究現(xiàn)狀、成果13-16
• 研究目的、方法16-17
• 一、人肝癌組織中BMP4與VM及臨床病理資料之間的的關系17-25
• 1.1 對象和方法17-19
• 1.1.1 病理資料17
• 1.1.2 免疫組化染色17
• 1.1.3 實驗方法17-19
• 1.1.4 免疫組化結果判定19
• 1.1.5 統(tǒng)計學分析19
• 1.2 結果19-23
• 1.2.1 肝癌患者臨床病理資料特征19
• 1.2.2 肝癌中VM的 形態(tài)學觀察19-21
• 1.2.3 肝癌中BMP4與VM，臨床病理參數(shù)的關系21-23
• 1.3 小結23-25
• 二、BMP4對肝癌細胞體外形成VM的影響25-44
• 2.1 對象和方法25-34
• 2.1.1 實驗材料25-29
• 2.1.2 研究方法29-34
• 2.1.3 統(tǒng)計學分析34
• 2.2 結果34-43
• 2.2.1 BMP4在HCC細胞系中的表達情況，在HepG2細胞中建立BMP4上調模型，在SMMC7721細胞中建立BMP4下調模型34-36
• 2.2.2 BMP4表達上調使HCC細胞的遷移侵襲能力增加，BMP4表達下調使HCC細胞的遷移侵襲能力降低36-38
• 2.2.3 BMP4表達上調促進體外HCC細胞VM形成，BMP4表達下調抑制HCC細胞VM形成38-39
• 2.2.4 上調BMP4誘導EMT的發(fā)生及干細胞標記物OCT4、SOX2的表達，， 下調BMP4抑制EMT的發(fā)生及OCT4、SOX2的表達39-40
• 2.2.5 BMP4通過EphA2/VE-cadherin/MMP2通路促進HCC VM形成40-43
• 2.3 小結43-44
• 討論44-49
• 結論49-50
• 參考文獻50-59
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明59-60
• 綜述60-69
• 綜述參考文獻66-69
• 致謝69

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1 王勇姿,俞超芹,凌昌全,衛(wèi)立辛;肝癌細胞系的研究概況[J];上海醫(yī)學;2000年02期

2 王蓬,陳孝平,PBSLai,CK Leow,Joseph W Y Lau;二十碳五烯酸對三種肝癌細胞系作用的實驗研究[J];中華普通外科雜志;2001年01期

3 彭林,王衛(wèi)東,孫建,簡志祥,杜嘉林,區(qū)金銳;穩(wěn)定表達促血管生成素基因肝癌細胞系的建立及產物的檢測[J];廣東醫(yī)學;2003年07期

4 趙蕩;陳宏武;許磊;劉飛勇;;不同時期肝癌免疫殺傷腫瘤細胞效應探討[J];中山大學學報(醫(yī)學科學版);2006年S1期

5 郭曉林;姜雅秋;金清龍;;多藥耐藥相關蛋白-3表達與肝癌耐藥的相關性[J];中國老年學雜志;2010年11期

6 ;離體培養(yǎng)的人體肝癌細胞系的建立[J];醫(yī)學研究通訊;1978年10期

7 陸榮華;陳尊器;陳瑞銘;;人體肝癌細胞系體外惡性浸潤行為的研究[J];細胞生物學雜志;1982年02期

8 張志培,施新猷,李六金,劉雪松,江遜,彭磊,趙佐慶;小鼠免疫力對接種人類肝癌細胞系9724生長的影響[J];第四軍醫(yī)大學學報;2001年07期

9 張志仁,徐順清,周宜開,任恕,劉志偉,呂斌,徐永俊;一株受二VA英類化學物質誘導表達的螢光素酶肝癌細胞系[J];中國生物化學與分子生物學報;2001年06期

10 董琳,王桂珍;從分子基因水平開展中醫(yī)藥防治肝癌的研究[J];甘肅中醫(yī);2002年04期

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1 符兆英;劉凱歌;徐光華;;肝癌細胞系中乙型肝炎病毒x蛋白與缺氧誘導因子-1α表達的研究[A];中國細胞生物學學會2005年學術大會、青年學術研討會論文摘要集[C];2005年

2 張朵;朱海英;謝東莆;胡以平;;肝癌細胞中存在SP細胞[A];中國細胞生物學學會2005年學術大會、青年學術研討會論文摘要集[C];2005年

3 汪謙;曹良啟;陳錫林;甄茂川;黃曉卉;傅新暉;;過氧化物酶增殖物激活受體活化抑制肝癌細胞遷移的研究[A];廣東省肝臟病學會2007年年會論文集[C];2007年

4 鄧欣;蔣小玲;李輝;吳其愷;聶廣;劉欽;;表達耐拉米夫定乙型肝炎病毒肝癌細胞系的建立[A];第一次全國中西醫(yī)結合傳染病學術會議論文匯編[C];2006年

5 吳塵軒;杜智;朱爭艷;高英堂;王毅軍;只丹琮;孫泉;;肝癌免疫治療微環(huán)境和樹突狀細胞體外誘導的實驗研究[A];天津市生物醫(yī)學工程學會2007年學術年會論文摘要集[C];2007年

6 趙主江;單云峰;樊紅;程欲超;成建;權艷梅;張建瓊;謝維;;DNMT3A siRNA穩(wěn)定表達載體的構建及其沉默效率的鑒定[A];江蘇省遺傳學會第七屆代表大會暨學術研討會論文摘要匯編[C];2006年

7 田德安;;RhoA短發(fā)夾狀雙鏈RNA對肝癌細胞生物學行為的調控研究[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編（下冊）[C];2007年

8 高倩;;肝癌HepG2細胞系分泌的免疫抑制物質的研究[A];第六屆全國免疫學學術大會論文集[C];2008年

9 代智;劉銀坤;馮巨濤;宋海燕;申華麗;張麗君;崔杰峰;;高低轉移潛能肝癌細胞系差異糖蛋白質組學研究[A];中國蛋白質組學第二屆學術大會論文摘要論文集[C];2004年

10 張盛周;俞明月;謝晶;戴谷;李朝軍;;Met與Fas基因在肝癌組織和肝癌細胞系中的表達[A];中國細胞生物學學會第八屆會員代表大會暨學術大會論文摘要集[C];2003年

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1 記者 胡德榮;肝癌患者自噬性缺陷表型與預后不良緊密相關[N];健康報;2008年

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1 王驥;凝集素富集糖肽聯(lián)合酶促~(18)O_3標記的定量N-糖蛋白組學方法在肝癌術后轉移復發(fā)研究中的應用[D];復旦大學;2012年

2 劉坤;Bcl-2/Twist1蛋白互作在缺氧促進肝癌血管生成擬態(tài)形成中的作用[D];天津醫(yī)科大學;2015年

3 張春虎;丹皮酚聯(lián)合氟尿嘧啶抗人不同肝癌細胞系作用及其機制研究[D];中南大學;2007年

4 張妤;基于微流控芯片的循環(huán)肝癌細胞檢測和微量腫瘤細胞培養(yǎng)[D];第二軍醫(yī)大學;2013年

5 周e

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