本文關鍵詞：CIP2A通過調(diào)節(jié)自噬水平影響宮頸癌細胞放療敏感性的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景宮頸癌作為女性發(fā)病率第二位的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤,嚴重威脅著女性健康。放射治療在宮頸癌治療中具有很重要的地位,然而并非所有的宮頸癌病例都對放療敏感。個體差異及腫瘤異質(zhì)性的存在使得不同病例產(chǎn)生對放射治療的不同敏感性。放療耐受的存在成為限制放射治療的療效和治療失敗的重要原因。因此研究放療耐受發(fā)生的原因,以及研究其發(fā)生過程中的分子機制具有很重要的意義,可以為克服放療耐受提供潛在的分子靶點。自噬作為生物進化過程中相對保守的一個代謝過程,廣泛存在于植物和其他低等生物的生命過程中。自噬在腫瘤治療中所起的作用一直存在爭議,人們形象的稱之為“雙刃劍”,近年放療領域的研究傾向于將自噬認為是放療的“增敏劑”。CIP2A是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種人類致癌蛋白,它主要是通過抑制PP2A對c-Myc 62位絲氨酸(S62)的去磷酸化,從而抑制了c-Myc蛋白的降解,增加了胞內(nèi)c-Myc的蛋白水平來發(fā)揮作用的。研究發(fā)現(xiàn),CIP2A在很多腫瘤都呈現(xiàn)過表達,并且與它們的惡性程度不良預后密切相關。我們課題組最近的研究發(fā)現(xiàn)CIP2A通過調(diào)節(jié)多藥耐藥蛋白(MDR)的產(chǎn)生,導致了宮頸癌細胞多藥耐藥的產(chǎn)生。研究目的1.明確CIP2A在宮頸癌中與放療耐受的關系。2.明確CIP2A在宮頸癌中與自噬之間的關系。3.驗證CIP2A在宮頸癌中調(diào)節(jié)放療耐受的機制。研究方法與結果1.CIP2A與宮頸癌放療敏感性的研究：對照組與干擾CIP2A組分別給予宮頸癌HeLla、SiHa細胞照射不同劑量的的X射線,然后通過細胞計數(shù)實驗,CCK8實驗,細胞生存率實驗檢測射線對HeLa、SiHa細胞的殺傷作用。實驗結果顯示：在特異性敲低CIP2A后,射線對HeLa、SiHa細胞增殖的抑制能力顯著增加,敲低CIP2A組細胞數(shù)量減少(p0.01,p0.05),增殖速度降低,克隆形成數(shù)也明顯減少(p0.05)。這表明,在HeLa、SiHa細胞中CIP2A與放療敏感性有關,敲低CIP2A能夠提高HeLa細胞對射線的敏感性。2.放射條件下,宮頸癌細胞中CIP2A與DNA損傷的關系的研究：利用Western Blotting實驗檢測敲低HeLa、SiHa細胞中的CIP2A后,剪切的PARP1的蛋白表達水平,然后通過DAPI實驗和彗星電泳實驗檢測凋亡小體的數(shù)量和細胞核的形態(tài)。結果顯示：敲低CIP2A后剪切的PARP1蛋白水平表達升高,DAPI實驗顯示凋亡小體增多,彗星試驗中拖尾細胞增多。這表明敲低CIP2A后HeLa, SiHa細胞中的DNA損傷加重。3.宮頸癌細胞照射下,CIP2A與自噬水平的研究：利用Western Blotting實驗檢測不同照射劑量下HeLa、SiHa細胞中對照組與干擾CIP2A組LC3B和P62蛋白表達水平,然后通過電鏡實驗檢測了HeLa細胞中的自噬小體數(shù)量。結果顯示：干擾CIP2A組LC3B蛋白表達水平升高,P62表達水平下降。電鏡實驗中,干擾CIP2A組自噬小體數(shù)量增多(p0.05)。這表明,在HeLa、SiHa細胞中,敲低CIP2A能上調(diào)細胞內(nèi)的自噬水平。4.驗證CIP2A是否通過抑制自噬降低了宮頸癌細胞的放療敏感性：在HeLa、 SiHa細胞里敲低CIP2A的基礎上,敲低自噬關鍵基因Beclinl的表達,通過克隆形成實驗驗證干擾組與對照組的細胞生存率。結果顯示：干擾Beclinl組的克隆形成數(shù)增多,細胞生存率增加(p0.01)。這表明：CIP2A可能通過抑制自噬降低了宮頸癌細胞的放療敏感性。結論：本研究首次證實了CIP2A參與調(diào)節(jié)宮頸癌的放療敏感性,這種作用主要是CIP2A通過抑制自噬來實現(xiàn)的。當我們加入自噬的干擾劑抑制自噬后,敲低CIP2A帶來的放療增敏也有了部分的回轉(zhuǎn)。因此,我們的研究結果提示,CIP2A作為一個新的基因治療靶標,在宮頸癌的綜合治療中有著潛在的應用前景。
【關鍵詞】：宮頸癌 放療耐受 CIP2A 自噬
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 縮略詞索引11-12
• 前言12-15
• 實驗材料與方法15-24
• 結果24-26
• 討論26-29
• 結論29-30
• 附圖30-34
• 參考文獻34-40
• 綜述40-55
• 參考文獻49-55
• 致謝55-56
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文56-57
• 學位論文評閱及答辯情況57

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本文編號：455865