溴結(jié)構(gòu)域蛋白4(bromodomain protein 4, BRD4)是BET蛋白質(zhì)家族成員,在哺乳細胞中廣泛表達,在整個有絲分裂周期內(nèi)始終與染色質(zhì)結(jié)合。BRD4通過招募不同的染色質(zhì)調(diào)節(jié)因子到染色質(zhì)上,影響染色質(zhì)結(jié)構(gòu)或重塑,從而調(diào)控基因表達,影響細胞周期,所以在基因轉(zhuǎn)錄、DNA復(fù)制和修復(fù)過程中十分重要。研究表明,BRD4在蛋白質(zhì)水平的表達失調(diào)與肺癌、乳腺癌、急性髓系淋巴瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān),因此,BRD4是重要的藥物靶標(biāo)。本研究對BRD4蛋白與DNA結(jié)合的作用關(guān)系進行了探索。構(gòu)建了BRD4不同結(jié)構(gòu)域的截短體,表達純化相應(yīng)的蛋白質(zhì)片段。通過電泳遷移率變動分析(EMSA)、熒光偏振(FA)和核磁共振滴定(NMR-HSQC)等多種技術(shù),檢測BRD4與DNA結(jié)合的作用區(qū)域,發(fā)現(xiàn)BRD4可通過有序結(jié)構(gòu)和無序區(qū)域與DNA結(jié)合,這種作用與DNA的核苷酸序列無關(guān)。BRD4蛋白的磷酸化能夠明顯地降低BRD4結(jié)合DNA的能力。另用免疫熒光觀察到BRD4蛋白能在細胞內(nèi)形成液態(tài)特性的核斑點(nuclear puncta)。BRD4核斑點對小分子化合物或者高鹽濃度敏感,符合液液相分離的...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 蛋白質(zhì)體外表達與純化
    1.3 雙鏈DNA的制備
    1.4 生物素標(biāo)記的雙鏈DNA的合成
    1.5 電泳遷移率變動分析(EMSA)
    1.6 熒光偏振(FA)檢測
    1.7 核磁共振(NMR)滴定
    1.8 免疫熒光鑒定
    1.9 蛋白質(zhì)磷酸化
    1.10 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 BRD4蛋白的N末端能結(jié)合DNA
    2.2 溴結(jié)構(gòu)域以及無序結(jié)構(gòu)區(qū)域?qū)NA親和力的影響
    2.3 BRD4蛋白與DNA的結(jié)合可以促進BRD4蛋白的液態(tài)相分離以及染色質(zhì)聚集
3 討論



本文編號：4016706