目的:本文旨在研究環(huán)氧合酶-2(COX-2)能否通過血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)誘導(dǎo)肺腺癌微血管形成。方法:將COX-2小分子干擾RNA(siRNA-COX-2),VEGF小分子干擾RNA(siRNA-VEGF)或COX-2過表達(dá)質(zhì)粒(p LV-COX-2)轉(zhuǎn)染到肺腺癌A549細(xì)胞中,WB驗證其轉(zhuǎn)染效率,轉(zhuǎn)染效率(29)70%的細(xì)胞用于后續(xù)試驗。對A549細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染后,分別提取細(xì)胞蛋白和細(xì)胞上清,然后利用WB和ELISA分別檢測細(xì)胞及上清液中VEGF的含量。將A549細(xì)胞上清液制成條件培養(yǎng)基,用來培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs),然后分別用MTT實驗評估HUVECs的增殖能力、細(xì)胞劃痕實驗評估HUVECs的遷移能力、細(xì)胞侵襲實驗評估HUVECs的侵襲能力,小管生成實驗評估HUVECs的小管生成能力。每組實驗重復(fù)3次,最后對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果:A549細(xì)胞成功轉(zhuǎn)染進(jìn)siRNA-COX-2后,細(xì)胞及上清液中VEGF的表達(dá)量顯著減少;A549細(xì)胞成功轉(zhuǎn)染進(jìn)p LV-COX-2后,細(xì)胞及上清液中VEGF的表達(dá)量顯著上升。siRNA-COX-2組HUVECs的增殖率、遷移率、侵襲細(xì)胞...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
1.前言
2.實驗材料
    2.1 細(xì)胞
    2.2 主要實驗試劑
    2.3 主要實驗器材
    2.4 主要實驗儀器
    2.5 實驗試劑配制
3.實驗方法
    3.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
    3.2 siRNA轉(zhuǎn)染(敲低COX-2和VEGF)
    3.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染(過表達(dá)COX-2)
    3.4 Western bloting
        3.4.1 細(xì)胞總蛋白提取及樣品的制備
        3.4.2 BCA定量
        3.4.3 SDS-PAGE
        3.4.4 轉(zhuǎn)膜
        3.4.5 麗春紅染色
        3.4.6 封閉及免疫反應(yīng)
        3.4.7 ECL顯色
    3.5 酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)
    3.6 MTT
    3.7 細(xì)胞劃痕實驗
    3.8 細(xì)胞侵襲實驗
    3.9 小管生成實驗
4.統(tǒng)計學(xué)分析
5.實驗結(jié)果
    5.1 COX-2對A549 細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響。
    5.2 COX-2對A549 細(xì)胞上清中VEGF表達(dá)的影響
    5.3 A549 細(xì)胞中COX-2對HUVECs增殖的影響
    5.4 A549 細(xì)胞中COX-2對HUVECs遷移的影響
    5.5 A549 細(xì)胞中COX-2對HUVECs侵襲的影響
    5.6 A549 細(xì)胞中COX-2對HUVECs小管生成的影響
6.討論
7.結(jié)論
8.參考文獻(xiàn)
9.附錄
    9.1 個人簡歷
    9.2 在校期間取得成果
        9.2.1 讀研期間獎勵
        9.2.2 讀研期間發(fā)表論文
        9.2.3 讀研期間申請專利
        9.2.4 讀研期間參與完成科研項目
10.致謝
11.綜述 環(huán)氧合酶2在腫瘤血管生成中的作用
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3906541