乳腺癌是女性最常見的癌癥,也是女性癌癥死亡的主要原因。目前藥物治療存在耐藥性,轉(zhuǎn)移、晚期、難治性乳腺癌仍缺乏有效治療手段。腫瘤相關(guān)的基因治療發(fā)展迅速,其中,腺病毒(Adenovirus,Ad)載體是腫瘤基因治療最常用的載體之一,主要分為條件復(fù)制型腺病毒和復(fù)制缺陷型腺病毒。溶瘤腺病毒屬于條件復(fù)制型腺病毒,可以在腫瘤細(xì)胞中選擇性復(fù)制并溶解腫瘤細(xì)胞,不影響正常細(xì)胞。但腫瘤微環(huán)境中存在抑制性免疫細(xì)胞,可抵消溶瘤病毒裂解腫瘤細(xì)胞后產(chǎn)生的免疫效應(yīng),抑制溶瘤腺病毒發(fā)揮作用。使用溶瘤腺病毒搭載免疫基因,可以激活機(jī)體免疫系統(tǒng),增強(qiáng)溶瘤腺病毒的抗腫瘤作用。LIGHT是腫瘤壞死因子配體家族成員,在T細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和增殖中發(fā)揮關(guān)鍵作用,可選擇性地誘導(dǎo)某些腫瘤細(xì)胞如同時表達(dá)淋巴毒素β受體(LTβR)和TR2/HVEM受體的腫瘤細(xì)胞凋亡,如231細(xì)胞,HT-29細(xì)胞,TIL1200。目前,LIGHT基因?qū)θ橄侔┑淖饔蒙形从醒芯�。因�?本研究的目的是評價溶瘤腺病毒r Ad.Light對乳腺癌的治療效果并初步闡明其作用機(jī)制。首先我們需要獲得r Ad.light、r Ad.Null、Ad.light和Ad.Null四種病毒。...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1.前言
2.材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 病毒及細(xì)胞
        2.1.3 主要試劑及配置
        2.1.4 儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 Ad.Light和 r Ad.Light的擴(kuò)增純化及鑒定
        2.2.2 Ad.Light和 r Ad.Light顆粒滴度和感染滴度測
        2.2.3 LIGHT對小鼠乳腺癌4T1 細(xì)胞增殖和凋亡的影響
        2.2.4 小鼠乳腺癌移植瘤模型的建立、分組及治療
        2.2.5 溶瘤腺病毒治療后腫瘤的體積和重量的記錄
        2.2.6 腫瘤組織病理學(xué)檢測
        2.2.7 腫瘤組織免疫組化分析
        2.2.8 腫瘤組織中的目的基因LIGHT、LIGHT受體及相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)檢測
        2.2.9 外周血T淋巴細(xì)胞表型檢測
3.結(jié)果
    3.1 Ad.Light和 r Ad.Light的擴(kuò)增純化及鑒定
        3.1.1 Ad.Ligh和 r Ad.Light的擴(kuò)增與純化
        3.1.2 瓊脂糖凝膠電泳鑒定Ad.Light和 r Ad.Light病毒
        3.1.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠4T1 細(xì)胞感染Ad.Light和 r Ad.Light后 LIGHT表達(dá)情況
    3.2 LIGHT對乳腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響
    3.3 r Ad.Light治療小鼠乳腺癌移植瘤的療效評價
        3.3.1 r Ad.Light抑制4T1 移植瘤的生長
        3.3.2 r Ad.Light促進(jìn)腫瘤細(xì)胞壞死及免疫細(xì)胞浸潤
    3.4 r Ad.Light治療小鼠乳腺癌移植瘤的機(jī)制研究
        3.4.1 r Ad.Light促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡及CD3+細(xì)胞浸潤
        3.4.2 RT-PCR分析腫瘤組織中LIGHT基因及其受體表達(dá)
        3.4.3 RT-PCR分析腫瘤組織中炎性細(xì)胞因子表達(dá)
        3.4.4 r Ad Light治療對T淋巴細(xì)胞表型的影響
4.討論
5.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
    個人簡歷
致謝
綜述 基因治療中常用溶瘤病毒載體的研究進(jìn)展
    1 癌癥基因治療的出現(xiàn)
    2 基因治療中常用的溶瘤病毒
        2.1 腺病毒
        2.2 Ⅰ型單純皰疹病毒
        2.3 痘苗病毒
    3 總結(jié)與展望
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3902541