肝細胞癌(HCC)發(fā)病率逐年增加,已經(jīng)成為威脅人類生命健康的重大疾病。HCC的早期診斷包括影像學(超聲、CT和磁共振)和血清學檢測等,由于影像學檢測成本較高,血清學特異性腫瘤標志物的檢測越來越受到人們的重視,其中甲胎蛋白(AFP)是當前診斷HCC最特異的標記物之一,但由于個體的差異,AFP檢測會出現(xiàn)假陽性或假陰性的結(jié)果,因此我們需要尋求新的生物標志物與AFP聯(lián)合診斷HCC,以提高診斷的準確性。近年,胰島素樣生長因子(IGF)家族蛋白成為HCC發(fā)展和進展中的重要因子,其中胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)在HCC病人血清中表達增高,與病人的不良預后相關(guān),但IGFBP2在HCC中的作用機制尚不清楚。研究表明,IGFBP2可通過IGF非依賴途徑介導細胞生長,蛋白的C端有Arg-Gly-Asp(RGD)結(jié)構(gòu)域與整合素受體β1(Integrinβ1)相互作用,Integrinβ1的活化狀態(tài)下,FAK發(fā)生磷酸化,可以介導下游信號通路的激活,如JNK通路、Rac1通路和Mek/Erk通路等,提示Integrinβ1可能作為其受體在HCC增殖中發(fā)揮作用。在HCC中,早期生長反應因子1(Egr-...

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【學位級別】：碩士

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英文縮略詞表(Abbreviation)
摘要
Abstract
一、前言
二、實驗
    實驗一 IGFBP2、Integrinβ1和Egr-1 在臨床HCC患者血清以及腫瘤組織中的表達
        1.實驗材料
            1.1 臨床樣本的采集
            1.2 材料與試劑
            1.3 實驗儀器
        2.實驗方法
            2.1 蛋白芯片法檢測HCC患者及健康人血清中IGFBP2 的含量
            2.2 HE染色法檢測HCC患者腫瘤組織及癌旁組織病理特征
            2.3 免疫組化法比較IGFBP2、Integrinβ1及Egr-1在HCC患者腫瘤組織及癌旁組織中的表達
            2.4 Western blot法比較IGFBP2、Integrinβ1及Egr-1在HCC患者肝癌組織及癌旁組織中的表達
                2.4.1 HCC患者腫瘤組織及癌旁組織蛋白的提取
                2.4.2 BCA法蛋白定量
                2.4.3 Western blot法
            2.5 統(tǒng)計學分析
        3 結(jié)果
            3.1 HCC患者血清和健康人血清中IGFBP2 的含量
            3.2 HCC患者中腫瘤組織及癌旁組織病理特征
            3.3 IGFBP2、Integrin β1 及 Egr-1 在 HCC 患者腫瘤組織及癌旁組織中的表達
            3.4 IGFBP2、Integrin β1、Egr-1 及 p-FAK 在 HCC 患者腫瘤組織及癌旁組織中的表達
        4 小結(jié)
    實驗二 IGFBP2對HCC細胞增殖、遷移和侵襲中的作用及分子影響
        1 實驗材料
            1.1 細胞
            1.2 試劑
            1.3 實驗儀器
        2 實驗方法
            2.1 CCK-8 法檢測不同濃度r IGFBP2對Hep G2和HCC-LM3 細胞增殖的影響
            2.2 Transwell法檢測不同濃度r IGFBP2對Hep G2和HCC-LM3 細胞遷移和侵襲的影響
            2.3 Western blot法檢測r IGFBP2 刺激Hep G2和HCC-LM3 細胞不同時間IGFBP2、Integrinβ1、p-FAK、Egr-1、p-Erk及 p-AKT蛋白的表達
            2.4 免疫熒光法檢測HCC細胞中活化的Integrinβ1 蛋白的表達
            2.5 Co-IP法檢測Hep G2 細胞中Integrinβ1和p-FAK的共表達
            2.6 統(tǒng)計學分析
        3 實驗結(jié)果
            3.1 不同濃度的rIGFBP2對Hep G2及HCC-LM3 細胞增殖的影響
            3.2 不同濃度rIGFBP2 刺激Hep G2及HCC-LM3 細胞遷移的影響
            3.3 不同濃度rIGFBP2對Hep G2和HCC-LM3 細胞侵襲的影響
            3.4 rIGFBP2 刺激Hep G2 細胞不同時間對IGFBP2、Integrinβ1、p-FAK、Egr-1、p-Erk和 p-AKT蛋白的表達的影響
            3.5 rIGFBP2對HCC細胞中活化的Integrinβ1 蛋白表達的影響
            3.6 rIGFBP2對Hep G2 細胞中Integrinβ1和p-FAK的共表達的影響
        4 小結(jié)
三、討論
    1.IGFBP2在HCC中的表達及臨床意義
    2.rIGFBP2 促進HCC細胞增殖、遷移和侵襲的作用可能與其上調(diào)Egr-1的表達有關(guān)
    3.在HCC中,IGFBP2 可能通過與其受體Integrinβ1 結(jié)合,活化FAK,繼而激活下游信號通路Mek/Erk,上調(diào)Egr-1 的表達
四、結(jié)論
五、下步工作設(shè)想
六、參考文獻
附錄
致謝
綜述 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白在肝細胞癌中的作用
    參考文獻



本文編號：3898391