隨著蛋白質(zhì)化學技術(shù)的突破性進展,雙/多特異性抗體的構(gòu)建方法和表達技術(shù)不斷創(chuàng)新。目前絕大多數(shù)雙/多特異性抗體是靶向T細胞并強化T細胞功能為原理設計的,已經(jīng)進入臨床試驗和臨床實用的產(chǎn)品展示出誘人前景。NK細胞是機體T細胞之外抗腫瘤的二大利器之一,本身具有廣譜的腫瘤殺傷能力,尤其在對抗冷腫瘤時展現(xiàn)出獨到的優(yōu)勢,近期被廣泛關(guān)注。同時,NK細胞具有強大的增強T細胞抗腫瘤免疫應答的能力,是T細胞發(fā)揮抗腫瘤的功能基礎。由于NK細胞在體內(nèi)存活時間較短,極大地限制了它在免疫治療中的作用。我們構(gòu)建了三特異性抗體用于再導向NK細胞,以此來研究它對NK細胞抗腫瘤作用的增強效應。1、雙/三特異性抗體構(gòu)建、表達與鑒定我們設計并構(gòu)建了三特異性抗體161519,它是由一段抗人CD16單鏈抗體、修飾人IL-15細胞因子和抗人CD19單鏈抗體組成。通過原核表達載體進行誘導表達,之后通過包涵體變、復性獲得了可溶形式的蛋白,利用SDS-PAGE和質(zhì)譜鑒定了純度和精確分子量。我們也將161519分子構(gòu)建到真核表達載體,通過CHO細胞表達并利用親和層析純化獲得了純度較高的蛋白。作為對照,我們也設計了雙特異性抗體1619(在161...

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【學位級別】：博士

圖１．２雙特異性抗體作用機制模式圖（ＡｒａｎＦ．?Ｌａｂｒｉｊｎｅｔａｌ．，２０１９）??

圖１．３?ＮＫ細胞介導的腫瘤殺傷的治療策略示意圖（Ｌａｕｒａ?Ｃｈｉｏｓｓｏｎｅ?ｅｔ?ａｌ．，２０１８）?

圖４．１?１６１５１９原核表達載體構(gòu)建??圖注：（Ａ）?１６１５１９基因元件設計模式圖，１６１５１９分子包含一段抗ＣＤ１６ｓｃＦｖ，人ＩＬ－??－

圖４．２?１６１５１９抗體表達條件和包涵體變復性條件探討??

本文編號：3888587