目的體外研究發(fā)現(xiàn)S100A4蛋白可與p53蛋白結(jié)合,但至今尚不清楚S100A4與p53蛋白能否在活細(xì)胞內(nèi)發(fā)生相互作用。本研究旨在確定S100A4與p53在活細(xì)胞內(nèi)的相互作用。方法采用光學(xué)生物傳感器體外檢測S100A4蛋白與p53蛋白的結(jié)合能力。應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡的熒光共振能量轉(zhuǎn)移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技術(shù)檢測Hela細(xì)胞(人宮頸癌細(xì)胞株)內(nèi)S100A4與p53蛋白的相互作用。結(jié)果光學(xué)生物傳感器體外檢測發(fā)現(xiàn),野生型S100A4蛋白與p53蛋白結(jié)合能力強(qiáng),對(duì)照組突變型S100A4蛋白則失去與p53蛋白的結(jié)合能力。采用FRET技術(shù)發(fā)現(xiàn),表達(dá)CFP-S100A4和p53-YFP融合蛋白的Hela細(xì)胞中,細(xì)胞核內(nèi)p53-YFP的熒光強(qiáng)度衰減后,CFP-S100A4的熒光強(qiáng)度增強(qiáng),發(fā)生FRET;而細(xì)胞質(zhì)中沒有發(fā)生FRET。作為對(duì)照,表達(dá)突變CFP-mS100A4-C和p53-YFP融合蛋白,或表達(dá)S100A4和YFP的Hela細(xì)胞內(nèi)沒有發(fā)生FRET,表明S100A4和p53之間的相互作用發(fā)生在活細(xì)胞的細(xì)胞核中。結(jié)論活細(xì)胞內(nèi)S10...

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑與儀器
    1.2 質(zhì)粒載體構(gòu)建
    1.3 重組融合蛋白表達(dá)
    1.4 體外檢測S100A4與p53結(jié)合能力
    1.5 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
    1.6 共聚焦激光掃描顯微鏡和FRET分析
2 結(jié)果
    2.1 體外鑒定S100A4與p53相互作用
    2.2 YFP熒光衰減和FRET檢測結(jié)果
3 討論



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