第一部分PIK3CD-AS1對腎癌細胞侵襲的影響及相關(guān)機制研究目的:研究PIK3CD-AS1對腎癌細胞侵襲能力的影響,探索可能存在的機制,為腎透明細胞癌診斷和預(yù)后提供參考。方法:我們首先利用實時定量PCR檢測構(gòu)建的穩(wěn)定高表達PIK3CD-AS1(簡稱PIK)的PIK細胞是否仍然高表達PIK;然后以PIK細胞作為實驗組,PEGFP細胞作為對照組,進行細胞侵襲實驗;根據(jù)生信分析結(jié)果,提取PIK細胞和PEGFP細胞的總蛋白,選擇p53為目的蛋白,利用Western blot檢測兩種細胞表達p53的情況。結(jié)果:實時定量PCR檢測結(jié)果顯示PIK細胞相對于PEGFP細胞仍高表達PIK;PIK細胞侵襲能力明顯弱于PEGFP細胞;Western blot檢測結(jié)果顯示PIK細胞表達p53蛋白明顯高于PEGFP細胞。結(jié)論:PIK3CD-AS1抑制腎癌細胞的侵襲遷移,可能的機制是PIK3CD-AS1促進腎癌細胞表達p53蛋白。第二部分DFFA在PIK3CD-AS1抑制腎癌細胞發(fā)生發(fā)展調(diào)控中發(fā)揮的作用研究目的:本課題組之前研究成果是PIK細胞較PEGFP細胞表達DFFA降低,深入研究DFFA在PIK細胞增殖、...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
引言
    參考文獻
實驗材料
實驗儀器
第一章 PIK3CD-AS1對腎癌細胞侵襲的影響及相關(guān)機制研究
    細胞與方法
        1.1 細胞株
        1.2 檢測上述PEGFP、PIK細胞中PIK3CD-AS1的表達量
        1.3 PIK3CD-AS1對腎癌細胞侵襲能力的影響
        1.4 Western blot檢測PIK3CD-AS1對腎癌細胞發(fā)揮作用相關(guān)機制
        1.5 統(tǒng)計方法
    實驗結(jié)果
        1.PEGFP細胞和PIK細胞中PIK3CD-AS1的表達
        2.侵襲實驗結(jié)果
        3.PIK3CD-AS1靶基因預(yù)測和驗證
    討論
    參考文獻
第二章 DFFA在PIK3CD-AS1抑制腎癌細胞發(fā)生發(fā)展調(diào)控中發(fā)揮的作用研究
    細胞與方法
        1.1 細胞株
        1.2 構(gòu)建過表達DFFA的769P^PIK+DFFA+細胞和對照組769P^PIK+DFFA-細胞
            1.2.1 大腸桿菌DH5α感受態(tài)的制備
            1.2.2 質(zhì)粒的擴增及提取
            1.2.3 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染、篩選及鑒定
        1.3 細胞增殖實驗
        1.4 細胞侵襲實驗
        1.5 細胞凋亡實驗
        1.6 蛋白印記實驗
        1.7 統(tǒng)計方法
    實驗結(jié)果
        1.PIK(空)細胞和PIK(DFFA+)細胞中DFFA表達情況
        2.高表達DFFA可促進PIK細胞增殖
        3.高表達DFFA可促進PIK細胞侵襲轉(zhuǎn)移
        4.高表達DFFA可促進PIK細胞的凋亡率
        5.PIK細胞表達p53明顯高于PEGFP細胞且表達pAKT明顯低于PEGFP細胞,而高表達DFFA抑制PIK細胞表達p53蛋白且促進其表達pAKT蛋白
    討論
    參考文獻
第三章 PIK3CD-AS1調(diào)控DFFA表達的機制分析
    細胞與方法
        1.1 細胞株
        1.2 檢測PEGFP細胞和PIK細胞中PIK3CD-AS1周圍基因表達情況
            1.2.1 細胞培養(yǎng)
            1.2.2 實時定量PCR檢測細胞中各個PIK3CD-AS1周圍1M基因表達情況
        1.3 統(tǒng)計方法
    實驗結(jié)果
        1.篩選結(jié)果
    討論
    參考文獻
第四章 SLC25A33在PIK3CD-AS1抑制腎癌細胞功能中的作用及機制研究
    細胞與方法
        1.1 細胞株
        1.2 構(gòu)建敲低SLC25A33的769P^{PIK+siRNA-SLC25A33}細胞及對照組769P^{PIK+siRNA-ctrl}細胞
            1.2.1 siRNA轉(zhuǎn)染
            1.2.2 轉(zhuǎn)染后細胞的鑒定
        1.3 細胞增殖實驗
        1.4 細胞侵襲實驗
        1.5 細胞凋亡實驗
        1.6 蛋白印記實驗
        1.7 實時定量PCR
        1.8 統(tǒng)計方法
    實驗結(jié)果
        1.PIK(siRNA-空)細胞和PIK(siRNA-SLC)細胞中SLC25A33表達情況
        2.敲低SLC25A33可促進PIK細胞增殖
        3.敲低SLC25A33可促進PIK細胞的侵襲轉(zhuǎn)移
        4.敲低SLC25A33可抑制PIK細胞的凋亡率
        5.PIK細胞表達p53明顯高于PEGFP細胞且表達pAKT明顯低于PEGFP細胞,而降低表達SLC25A33可抑制PIK細胞表達P53蛋白且促進其表達PAKT蛋白
        6.PIK細胞敲低SLC25A33后高表達DFFA
    討論
    參考文獻
第五章 p53及pAKT與PIK3CD-AS1抑制腎癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系
    細胞與方法
        1.1 細胞株
        1.2 構(gòu)建下調(diào)表達p53的PEGFP、PIK、PIK(空)、PIK(DFFA+)細胞和下調(diào)表達pAKT的PEGFP、PIK、PIK(空)、PIK(DFFA+)細胞
            1.2.1 siRNA轉(zhuǎn)染
        1.3 細胞增殖實驗
        1.4 細胞侵襲實驗
        1.5 細胞凋亡實驗
        1.6 統(tǒng)計方法
    實驗結(jié)果
        1.細胞增殖實驗
            1.1 p53可能是PIK細胞增殖活性明顯低于PEGFP細胞的關(guān)鍵因素
            1.2 pAKT可能是PIK細胞增殖活性明顯低于PEGFP細胞的關(guān)鍵因素
            1.3 p53可能是PIK(DFFA+)細胞增殖活性明顯高于PIK(空)細胞的關(guān)鍵因素
            1.4 pAKT可能是PIK(DFFA+)細胞增殖活性明顯高于PIK(空)細胞的關(guān)鍵因素
        2.侵襲實驗
            2.1 p53可能是PIK細胞侵襲能力明顯低于PEGFP細胞的關(guān)鍵因素
            2.2 pAKT可能是PIK細胞侵襲能力明顯低于PEGFP細胞的關(guān)鍵因素
            2.3 p53可能是PIK(DFFA+)細胞侵襲能力明顯強于PIK(空)細胞的關(guān)鍵因素
            2.4 pAKT可能是PIK(DFFA+)細胞侵襲能力明顯強于PIK(空)細胞的關(guān)鍵因素
        3.凋亡實驗
            3.1 p53可能是PIK細胞凋亡率明顯高于PEGFP細胞的關(guān)鍵因素
            3.2 pAKT可能是PIK細胞凋亡率明顯高于PEGFP細胞的關(guān)鍵因素
            3.3 p53可能是PIK(DFFA+)細胞凋亡率明顯低于PIK(空)細胞的關(guān)鍵因素
            3.4 pAKT可能是PIK(DFFA+)細胞凋亡率明顯低于PIK(空)細胞的關(guān)鍵因素
    討論
    參考文獻
第六章 結(jié)論與展望
綜述
    參考文獻
致謝



本文編號：3826644