為證明Lin28B/let-7通路與肝癌紫杉醇耐藥密切相關(guān)和采用濃度梯度間歇刺激法建立Hep3B/PTX耐藥細(xì)胞系。通過四甲基偶氮唑鹽比色(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)分析Guava微流式分析對(duì)Hep3B/PTX耐藥細(xì)胞系進(jìn)行鑒定,realtime PCR檢測(cè)耐藥細(xì)胞中Lin28B及l(fā)et-7表達(dá)水平。經(jīng)過6個(gè)月的誘導(dǎo),Hep3B/PTX耐藥細(xì)胞系對(duì)紫杉醇的耐藥指數(shù)為13.55;與親本細(xì)胞相比,Hep3B/PTX處于G0/G1期的細(xì)胞比例較高,S期的細(xì)胞比例較低;0.2μmol/L紫杉醇處理親本細(xì)胞24h后,有(41.73±1.80)%細(xì)胞發(fā)生凋亡,而Hep3B/PTX細(xì)胞凋亡率只有(17.21±3.60)%;real-time PCR發(fā)現(xiàn),Hep3B/PTX與親本細(xì)胞相比,Lin28B基因表達(dá)水平升高了49倍,而Lin28B調(diào)控的let-7家族成員表達(dá)水平均有不同程度的降低。Hep3B/PTX細(xì)胞中Lin28B基因和let-7家族成員表達(dá)量的變化揭示了肝癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇的耐藥與Lin28B/let-7通路相關(guān),Lin28B基因可能通過影響let-7...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 藥物與試劑
    1.2 耐藥細(xì)胞系的篩選
    1.3 MTT法檢測(cè)紫杉醇對(duì)Hep3B/PTX細(xì)胞增殖的IC50
    1.4 Guava easyCyte Flow Cytometers檢測(cè)細(xì)胞周期
    1.5 Guava easyCyte Flow Cytometers檢測(cè)細(xì)胞凋亡
    1.6 real-time PCR檢測(cè)Lin28B基因的表達(dá)
    1.7 real-time PCR檢測(cè)let-7家族的表達(dá)
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 人肝癌耐藥細(xì)胞系Hep3B/PTX的建立
    2.2 Hep3B與Hep3B/PTX的細(xì)胞周期檢測(cè)
    2.3 紫杉醇誘導(dǎo)的Hep3B及Hep3B/PTX細(xì)胞凋亡檢測(cè)
    2.4 Lin28B基因在Hep3B/PTX細(xì)胞中的表達(dá)
    2.5 Hep3B和Hep3B/PTX細(xì)胞中l(wèi)et-7家族各成員表達(dá)的差異
3 討論
4 結(jié)論



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