發(fā)布時(shí)間：2023-04-30 04:01

　　目的探討Rho/ROCK信號(hào)通路干預(yù)對人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系RPMI8226細(xì)胞生物學(xué)特性及其Rho家族成員Rho C、ROCK家族成員中ROCK1/ROCK2表達(dá)的影響。方法5-氮雜-2ˊ-脫氧胞苷(5-Aza-Dc)、古曲霉素A(TSA)單獨(dú)或聯(lián)合作用于RPMI8226細(xì)胞系,用實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈鎖反應(yīng)(q RT-PCR)及蛋白印跡(Western Blot)檢測藥物作用后Rho C、ROCK1及ROCK2的表達(dá);Rho A抑制劑CCG-1423、Rac1抑制劑NSC23766、ROCK抑制劑fasudil作用于RPMI8226細(xì)胞,應(yīng)用Cell counting Kit-8(CCK-8)法檢測細(xì)胞增殖活性,流式細(xì)胞儀(FCM)檢測細(xì)胞凋亡水平。結(jié)果CCG-1423、NSC23766、fasudil在一定濃度范圍內(nèi)可抑制RPMI8226細(xì)胞的生長,且呈劑量和時(shí)間依賴性(P<0.05);流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示CCG-1423、NSC23766處理RPMI8226細(xì)胞后,細(xì)胞凋亡率較對照組明顯升高,而fasudil組與對照組相比,細(xì)胞凋亡率較低,呈劑量依賴性(P<0.05);...

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 細(xì)胞
    1.2 試劑
    1.3 儀器
第二章 方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)分組
    2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
    2.3 細(xì)胞凍存
    2.4 CCK-8 法檢測細(xì)胞增殖能力
    2.5 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡水平
    2.6 qRT-PCR方法檢測細(xì)胞系Rho、ROCK1和ROCK2基因表達(dá)水平
        2.6.1 提取細(xì)胞總RNA（Trizol法）
        2.6.2 將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA
        2.6.3 引物的合成
        2.6.4 qRT-PCR檢測RhoC、ROCK1及ROCK2 mRNA的表達(dá)
    2.7 Western Blot檢測RhoC、ROCK1及ROCK2蛋白表達(dá)水平
        2.7.1 蛋白質(zhì)提取
        2.7.2 制備SDS-PAGE凝膠
        2.7.4 蛋白質(zhì)變性和電泳
        2.7.5 凝膠轉(zhuǎn)膜
        2.7.6 抗體孵育
        2.7.7 曝光及掃描
    2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 結(jié)果
    3.1 CCK-8 法檢測細(xì)胞增殖
    3.2 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果
    3.3 qRT-PCR分析RhoC、ROCK1及ROCK2的表達(dá)量
    3.4 Western blot檢測RhoC、ROCK1及ROCK2蛋白的表達(dá)結(jié)果
第四章 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 Rho蛋白在腫瘤中的研究進(jìn)展
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間成果
致謝



本文編號(hào)：3806379