胃癌是全球第三大癌癥死亡原因,嚴重危害人類的生命健康。中國的胃癌病例數量約占全球的50%以上,并且胃癌的發(fā)病率和死亡率仍在逐年上升。雖然大多數胃癌病例是散發(fā)性的,但仍有約10%的病例表現為家族聚集,其中僅有部分家系的遺傳易感原因是已知的,通常是由于基因突變引起的蛋白質功能缺失。在本研究中我們調查了1個胃癌家系,并且旨在鑒定該家系的胃癌易感基因。我們采集了該家系的外周血樣本,選取其中的3例胃癌患者和1例正常樣本進行全外顯子組測序,并對測序數據進行了生物信息分析,共得到822905個SNV突變位點和208617個In Del突變位點。然后進行易感基因篩選,最終得到了12個SNV突變位點和9個In Del突變位點作為候選易感基因。其中SAMD9L在多種癌癥中作為抑癌基因調控細胞增殖,而SAMD9L p.T832fs突變可能導致該基因功能缺失。我們在胃癌SGC-7901細胞中使用si RNA對SAMD9L進行敲減,發(fā)現SAMD9L基因表達水平的降低顯著增強了SGC-7901細胞的增殖、遷移和侵襲能力。接下來在SGC-7901細胞中轉染SAMD9L p.T832fs突變型過表達質粒,發(fā)現對SGC...

【文章頁數】：62 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語對照表
第一章 緒論
    1.1 胃癌的流行病學概述
    1.2 胃癌的主要分子機制
        1.2.1 胃癌中的基因突變
        1.2.2 表觀遺傳改變
        1.2.3 非編碼RNA的作用
    1.3 家族性胃癌研究進展
    1.4 全外顯子組測序簡介
    1.5 實驗設計與意義
第二章 全外顯子組測序及易感基因篩選
    2.1 前言
    2.2 材料和設備
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 全外顯子組測序
        2.3.2 測序數據分析
        2.3.3 外周血基因組DNA提取
        2.3.4 測序結果驗證
    2.4 實驗結果
        2.4.1 全外顯子組測序分析結果
        2.4.2 易感基因篩選結果
        2.4.3 一代測序驗證結果
第三章 SAMD9L基因功能驗證
    3.1 前言
    3.2 材料和設備
        3.2.1 細胞株
        3.2.2 主要儀器
        3.2.3 主要試劑
        3.2.4 主要溶液的配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細胞復蘇
        3.3.2 細胞傳代
        3.3.3 細胞凍存
        3.3.4 SAMD9L基因敲減
        3.3.5 細胞總RNA提取
        3.3.6 q RT-PCR驗證基因表達
        3.3.7 CCK-8檢測細胞增殖
        3.3.8 平板克隆形成實驗
        3.3.9 劃痕實驗
        3.3.10 細胞遷移實驗
        3.3.11 細胞侵襲實驗
        3.3.12 細胞凋亡實驗
    3.4 實驗結果
        3.4.1 q RT-PCR驗證SAMD9L基因敲減結果
        3.4.2 敲減SAMD9L促進胃癌細胞增殖和克隆形成
        3.4.3 敲減SAMD9L促進胃癌細胞遷移和侵襲
        3.4.4 敲減SAMD9L對細胞凋亡的影響
第四章 SAMD9L p.T832fs突變功能驗證
    4.1 前言
    4.2 材料和設備
        4.2.1 主要試劑
        4.2.2 主要儀器
    4.3 實驗方法
        4.3.1 過表達載體構建
        4.3.2 質粒提取
        4.3.3 質粒轉染
        4.3.4 q RT-PCR驗證過表達效率
    4.4 實驗結果
        4.4.1 q RT-PCR驗證過表達結果
        4.4.2 過表達突變型SAMD9L質粒對SGC-7901 細胞無顯著影響
結論與討論
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間取得的科研成果



本文編號：3803385