肝癌是癌癥相關(guān)死亡的第二大主要原因,而肝細(xì)胞癌是最常見的原發(fā)性肝癌類型。TGF-β在肝癌發(fā)展的早期和晚期階段發(fā)揮不同的作用,它能促進(jìn)肝癌細(xì)胞遷移和侵襲等。TEAD4屬于TEAD轉(zhuǎn)錄因子家族,主要通過結(jié)合YAP/TAZ等轉(zhuǎn)錄輔助因子來發(fā)揮作用。有研究表明TEAD和YAP蛋白可以與Smad蛋白結(jié)合,然而TEAD4在TGF-β信號(hào)調(diào)控和Smad蛋白誘導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的功能需要更深入研究。本論文研究發(fā)現(xiàn):過量表達(dá)TEAD4蛋白可以抑制TGF-β信號(hào),并在基因組范圍內(nèi)抑制TGF-β靶基因的表達(dá);TEAD4通過抑制Smad蛋白的轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性而減弱TGF-β誘導(dǎo)的靶基因表達(dá);功能上,TEAD4抑制TGF-β誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞遷移、侵襲和增殖;有趣的是,無論是野生型還是不與YAP結(jié)合的突變體TEAD4,都能抑制TGF-β信號(hào)、Smad蛋白的轉(zhuǎn)錄活性、靶基因表達(dá),以及肝癌細(xì)胞遷移、侵襲和增殖。因此,本論文研究闡明了TEAD4蛋白能以不依賴YAP的方式抑制TGF-β/Smad信號(hào)的作用與分子機(jī)制,以及這種調(diào)控作用在肝癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能。

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 肝癌的簡(jiǎn)介
    1.2 TGF-β細(xì)胞因子
    1.3 TEAD家族轉(zhuǎn)錄因子
    1.4 TEAD和 TGF-β在肝癌中的作用
    1.5 TEAD蛋白和TGF-β信號(hào)的研究進(jìn)展
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要儀器設(shè)備
        2.1.2 主要試劑材料
        2.1.3 主要細(xì)胞及病毒
    2.2 方法
        2.2.1 主要試劑配制
        2.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.2.3 細(xì)胞換液
        2.2.4 細(xì)胞傳代
        2.2.5 細(xì)胞凍存
        2.2.6 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.2.7 RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄、實(shí)時(shí)定量PCR(Q-PCR)
        2.2.8 RNA-Seq
        2.2.9 免疫共沉淀
        2.2.10 Western blot
        2.2.11 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        2.2.12 細(xì)胞遷移
        2.2.13 基質(zhì)膠侵襲
        2.2.14 細(xì)胞增殖
        2.2.15 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.16 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 TEAD4 蛋白抑制TGF-β信號(hào)
    3.1 TEAD蛋白抑制TGF-β信號(hào)
    3.2 全基因組范圍檢測(cè)TGF-β靶基因表達(dá)
    3.3 TEAD4 蛋白抑制Smad蛋白的轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性
    3.4 TEAD蛋白可以和Smad相互作用
    3.5 TEAD4 抑制TGF-β誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲
    3.6 討論
第四章 TEAD4以YAP非依賴的方式抑制TGF-β信號(hào)
    4.1 不結(jié)合YAP蛋白的TEAD4 點(diǎn)突變體質(zhì)粒的構(gòu)建和驗(yàn)證
    4.2 TEAD4以YAP非依賴的方式抑制TGF-β信號(hào)和Smad轉(zhuǎn)錄活性
    4.3 TEAD4 點(diǎn)突變抑制TGF-β誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖、遷移及侵襲
    4.4 討論
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 進(jìn)一步工作方向
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3791633