背景:食管癌是人類常見的惡性腫瘤之一,我國是食管癌的高發(fā)地區(qū),發(fā)病率和死亡率均居世界首位,且有著不斷上升的趨勢。食管癌的發(fā)生涉及到原癌基因的激活、抑癌基因的失活等改變,其中也伴隨著表觀遺傳學的變化,表觀遺傳學的異常改變可導(dǎo)致抑癌基因的失活,其中DNA甲基化是最常見的表觀遺傳學改變之一。G₀S₂基因是近年來發(fā)現(xiàn)的具有抑制癌癥發(fā)生、發(fā)展作用的基因,其在正常組織、細胞中普遍表達,而在癌組織和癌細胞中表達水平顯著降低。G₀S₂基因在食管癌中的作用需作進一步的驗證和探索。目的:觀察G₀S₂基因在食管癌組織和食管癌旁組織中的表達差異并檢測其甲基化的情況以及探討其對食管癌細胞增殖、凋亡的影響。方法:(1)收集2016年3月²017年4月在十堰市人民醫(yī)院手術(shù)切除的45例食管癌組織及相應(yīng)的食管癌旁組織(選取距癌組織邊緣>5 cm的食管組織),所有組織均通過倫理委員會審核。對收集到的組織樣本進行RNA的提取,并測定所提取樣本RNA的濃度和純度。采用...

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【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
英文縮略語表
一、引言
二、實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗樣本
        2.1.2 主要藥品與試劑
    2.2 實驗方法與步驟
        2.2.1 組織總RNA的提取
        2.2.2 組織RNA逆轉(zhuǎn)錄主要步驟
        2.2.3 組織RNA的qRT-PCR擴增和表達檢測
        2.2.4 食管癌組織DNA的提取
        2.2.5 DNA甲基化修飾試劑盒處理組織DNA
        2.2.6 亞硫酸氫鹽法處理組織基因組DNA
        2.2.7 DNA產(chǎn)物純化實驗
        2.2.8 甲基化特異性PCR
        2.2.9 TBE電泳緩沖液的配制
        2.2.10 核酸電泳實驗
        2.2.11 食管癌KYSE-70細胞的復(fù)蘇與凍存
        2.2.12 體外培養(yǎng)食管癌KYSE-70細胞以及細胞的處理
        2.2.13 食管癌KYSE-70細胞RNA的提取
        2.2.14 食管癌KYSE-70細胞RNA的逆轉(zhuǎn)錄和qRT-PCR擴增
        2.2.15 CCK8法檢測細胞的增殖活性
        2.2.16 Annexin V/FITC法細胞凋亡檢測
        2.2.17 統(tǒng)計學方法
三、實驗結(jié)果
    3.1 G₀S₂基因在食管癌組織和食管癌旁組織中的表達變化
    3.2 G₀S₂基因在食管癌組織和食管癌旁組織中甲基化檢測
    3.3 腺病毒轉(zhuǎn)染后的驗證
    3.4 甲基化抑制劑處理后癌細胞G₀S₂mRNA表達量變化
    3.5 G₀S₂對食管癌KYSE-70細胞增殖的作用
    3.6 5-氮雜-2-脫氧胞苷對食管癌KYSE-70細胞增殖的作用
    3.7 G₀S₂對食管癌KYSE-70細胞凋亡的作用
    3.8 5-氮雜-2-脫氧胞苷對食管癌KYSE-70細胞凋亡的影響
四、討論
五、小結(jié)
參考文獻
六、文獻綜述
    參考文獻
七、論文發(fā)表情況
八、致謝詞



本文編號：3791150