研究目的利用前列腺癌腫瘤相關成纖維細胞(CAF)與正常成纖維細胞(NF)分泌的exosome分別處理腫瘤細胞,初步探討CAF來源的exosome及其所含的特定生物分子在前列腺癌細胞發(fā)生上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)中的作用。研究方法(1)利用Western Blot和細胞免疫熒光(IF)的方法鑒定CAF與NF,并提取CAF與NF的條件培養(yǎng)基處理前列腺腫瘤細胞,Western Blot驗證不同培養(yǎng)基對腫瘤細胞的影響。(2)利用超高速梯度離心技術提取CAF與NF條件培養(yǎng)基中的exosome,并使用透射電子顯微鏡對其進行鑒定。(3)利用PKH-67對CAF及NF分泌exosome進行染色,IF下觀察腫瘤細胞對exosome的攝取情況。(4)利用Transwell migration assay,Western Blot和IF分析exosome對前列腺腫瘤細胞遷移作用及EMT的影響。(5)查閱相關文獻及數(shù)據(jù)庫,初步鑒定可能引起上述作用的mi RNA,利用RT-PCR及q PCR進行分析及定量,利用mi RNA抑制劑處理CAF及NF后重復上述實驗,并通過Transwell migration assa...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
1 對象和方法
    1.1 實驗對象
    1.2 實驗試劑及儀器
    1.3 實驗方法
2 結(jié)果
    2.1 鑒定腫瘤相關成纖維細胞（CAF）與正常成纖維細胞（NF）
    2.2 CAF及NF條件培養(yǎng)基對前列腺腫瘤細胞EMT轉(zhuǎn)化的影響
    2.3 鑒定exosome
    2.4 IF檢測前列腺腫瘤細胞吸收exosome情況
    2.5 Exosome對前列腺腫瘤細胞遷移能力的影響
    2.6 Exosome對前列腺腫瘤細胞EMT轉(zhuǎn)化的影響
    2.7 通過文獻及數(shù)據(jù)庫查找相關miRNA并驗證表達情況
    2.8 PCR檢測四種miRNA在exosome中表達情況
    2.9 攝取exosome后前列腺腫瘤細胞內(nèi)miRNA水平變化情況
    2.10 MiRNA inhibitor處理后相關miRNA的表達水平
    2.11 MiRNA inhibitor處理后CAF exosome對前列腺腫瘤細胞EMT的影響
    2.12 MiRNA inhibitor處理后CAF exosome對前列腺腫瘤細胞遷移能力的影響
3.討論
結(jié)論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 外泌體在惡性腫瘤進展中的作用及診療意義
    綜述參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3789978