我們先前發(fā)現(xiàn)CXCL16/CXCR6趨化因子軸激活A(yù)KT/mTOR信號可促進前列腺癌發(fā)展。多項研究表明CXCL16/CXCR6趨化因子軸也參與其他腫瘤進展,如肝癌,卵巢癌,膀胱癌等。然而,其在乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移中作用有待進一步研究。在本研究中,通過組織芯片免疫組化染色分析CXCR6在乳腺癌和正常乳腺組織芯片中的表達,發(fā)現(xiàn)CXCR6在乳腺癌組織中的表達高于正常乳腺組織,且在轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)中的表達也明顯高于正常淋巴結(jié),提示CXCR6可能參與了乳腺癌的轉(zhuǎn)移。流式細胞術(shù)分析CXCR6在多種乳腺癌細胞系和正常乳腺上皮細胞系HBL100中的表達,發(fā)現(xiàn)CXCR6在乳腺癌細胞系中的表達陽性率高于正常乳腺上皮細胞系HBL100,且在高轉(zhuǎn)移性的MDA-231細胞中的陽性率最高。為了揭示CXCR6在乳腺癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用,我們利用慢病毒系統(tǒng)構(gòu)建CXCR6穩(wěn)定過表達的乳腺癌細胞系;劃痕愈合和Transwell細胞侵襲實驗表明CXCR6能促進乳腺癌細胞的遷移和侵襲;在機制研究上,我們發(fā)現(xiàn)CXCL16/CXR6趨化因子軸并不影響乳腺癌細胞的EMT進程,但能夠顯著激活ERK1/2信號通路;敲低CXCR6的表達或...

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
一、緒論
二、材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器與設(shè)備
        2.1.2 主要試劑、耗材
        2.1.3 實驗室自配試劑
    2.2 方法
        2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        2.2.3 質(zhì)粒DNA小量提取
        2.2.4 質(zhì)粒DNA大量抽提
        2.2.5 瓊脂糖凝膠DNA片段回收
        2.2.6 細胞復(fù)蘇、傳代、凍存
        2.2.7 細胞轉(zhuǎn)染
        2.2.8 過表達細胞系構(gòu)建
        2.2.9 外源細胞因子刺激實驗
        2.2.10 劃痕愈合實驗
        2.2.11 Transwell chamber小室檢測細胞侵襲實驗-Invasion
        2.2.12 流式細胞術(shù)檢測細胞周期
        2.2.13 CXCR6基因的穩(wěn)定敲除-shRNA
        2.2.14 蛋白免疫印跡
        2.2.15 基因表達譜芯片
        2.2.16 Trizol法提取細胞總RNA
        2.2.17 逆轉(zhuǎn)錄及Real-time PCR
        2.2.18 免疫熒光染色、鬼筆環(huán)肽染色
        2.2.19 GST-pull down實驗檢測RhoA活性
        2.2.20 點突變試劑盒構(gòu)建RhoA^N19和RhoA^V14質(zhì)粒
        2.2.21 小鼠尾靜脈注射-活體成像
        2.2.22 蘇木素-伊紅染色
        2.2.23 免疫組化染色
        2.2.24 統(tǒng)計學(xué)分析
三、結(jié)果
    3.1 CXCR6在乳腺癌組織和細胞系中的表達
    3.2 CXCR6過表達細胞系的構(gòu)建
    3.3 CXCR6促進乳腺癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移
    3.4 CXCL16/CXCR6趨化因子軸不影響乳腺癌細胞的EMT進程
    3.5 CXCL16/CXCR6趨化因子軸促進乳腺癌細胞ERK1/2 通路的活化
    3.6 CXCL16/CXCR6趨化因子軸促進乳腺癌細胞遷移依賴于ERK1/2 通路的活化
    3.7 基因芯片分析CXCR6過表達對乳腺癌細胞全基因轉(zhuǎn)錄組的調(diào)控
    3.8 CXCR6過表達細胞系F-actin聚合增多
    3.9 CXCL16/CXCR6趨化因子軸調(diào)控F-actin的聚合依賴于ERK1/2 通路的激活
    3.10 CXCL16/CXCR6趨化因子促進Cofilin，F(xiàn)AK的磷酸化
    3.11 CXCL16/CXCR6趨化因子軸通過激活ERK1/2 促進RhoA/Cofilin通路的活化
    3.12 RhoA的活性狀態(tài)影響F-actin的形成
    3.13 RhoA的活性狀態(tài)影響乳腺癌細胞的遷移和侵襲
    3.14 體內(nèi)實驗表明敲低CXCR6的表達能夠抑制乳腺癌細胞的肺轉(zhuǎn)移
四、討論
五、總結(jié)
六、參考文獻
七、全文縮略詞中英文對照表
八、致謝
九、攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的文章



本文編號：3774773