目的:低氧能促進腫瘤的侵襲和遷移。HepG2細胞中轉(zhuǎn)錄輔抑制因子CtBP1抑制了上皮細胞黏附分子E-cadherin的表達,促進了細胞的侵襲和遷移;CtBP1是否介導了低氧誘導的腫瘤細胞遷移尚不明確。本研究通過體外細胞培養(yǎng),觀察低氧對人肝癌HepG2細胞遷移能力的影響,及HepG2細胞中CtBP1蛋白及其靶基因上皮細胞黏附分子E-cadherin蛋白表達的改變;并采用siRNA干擾技術,敲低CtBP1的表達,探討CtBP1是否介導了低氧對肝癌細胞遷移的促進作用,為闡明肝細胞肝癌惡性進展的分子機制及靶向治療提供新的理論依據(jù)。方法:Western blot法檢測肝癌細胞株HUH7、BEL-7402、BEL-7404、SMMC-7721及HepG2細胞中CtBP1蛋白的表達情況。根據(jù)檢測結(jié)果,我們采用CtBP1表達最高的HepG2細胞,轉(zhuǎn)染CtBP1 siRNA,用于后續(xù)實驗。本實驗共分為兩部分:第一部分觀察低氧條件下HepG2細胞遷移能力及細胞形態(tài)的改變。采用細胞劃痕實驗檢測不同缺氧時間(24小時,48小時)對HepG2細胞遷移運動能力的影響、采用免疫熒光法檢測低氧對HepG2細胞骨架結(jié)構(gòu)...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
英漢縮略詞對照表
前言
1 材料與方法
    1.1 實驗材料
        1.1.1 細胞株
        1.1.2 主要實驗試劑及耗材
            1.1.2.1 細胞培養(yǎng)試劑
            1.1.2.2 細胞轉(zhuǎn)染試劑
            1.1.2.3 分子生物學實驗試劑
            1.1.2.4 其他普通試劑及耗材
        1.1.3 所需主要實驗試劑的配制
        1.1.4 主要實驗儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)
            1.2.1.1 人肝癌細胞的復蘇
            1.2.1.2 人肝癌細胞的換液
            1.2.1.3 人肝癌細胞的傳代
            1.2.1.4 人肝癌細胞的計數(shù)和接種
            1.2.1.5 人肝癌細胞的凍存
        1.2.2 建立細胞低氧模型
        1.2.3 人肝癌細胞株HepG2的CtBP1 siRNA(h)轉(zhuǎn)染
            1.2.3.1 最佳干擾濃度的篩選
            1.2.3.2 人肝癌細胞株HepG2的CtBP1 siRNA(h)轉(zhuǎn)染和低氧實驗
        1.2.4 Western blot法測低氧條件下轉(zhuǎn)染后HepG2細胞CtBP1和E-cadherin的表達
            1.2.4.1 HepG2細胞總蛋白的提取
            1.2.4.2 BCA蛋白濃度的測定
            1.2.4.3 樣品蛋白上樣體系的配制
            1.2.4.4 SDS-PAGE凝膠的配制
            1.2.4.5 SDS-PAGE凝膠電泳
            1.2.4.6 蛋白質(zhì)的濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)模
            1.2.4.7 蛋白質(zhì)的免疫反應
            1.2.4.8 蛋白質(zhì)的檢測
        1.2.5 細胞劃痕實驗檢測低氧條件下轉(zhuǎn)染后HepG2細胞的遷移運動能力
        1.2.6 細胞免疫熒光染色檢測低氧條件下轉(zhuǎn)染后HepG2細胞的形態(tài)化
        1.2.7 統(tǒng)計學方法
2 結(jié)果
    2.1 CtBP1在肝癌細胞中的表達
    2.2 低氧條件下HepG2細胞的遷移運動能力逐漸增強且細胞形態(tài)從上皮樣多邊形轉(zhuǎn)變?yōu)殚g質(zhì)樣梭形
    2.3 低氧作用于HepG2細胞使CtBP1表達上調(diào)而其靶蛋白上皮黏附分子E-cadherin表達下調(diào)
    2.4 當CtBP1 siRNAs（h）濃度為0.06pmol/μl時干擾效率最高
    2.5 敲低CtBP1抑制了低氧對HepG2細胞遷移運動能力的促進作用且抑制了低氧條件下間質(zhì)樣細胞形態(tài)的改變
    2.6 敲低CtBP1基因部分挽救了低氧對E-cadherin表達的抑制作用
3 討論
4 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄
致謝



本文編號：3774006