多發(fā)性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)是一種血液系統(tǒng)惡性漿細胞腫瘤性疾病,其特征為單克隆免疫球蛋白及骨髓漿細胞異常增生,主要在腎臟、心臟及肝臟等器官內(nèi)累積。多發(fā)性骨髓瘤常伴有多發(fā)性溶骨性損害、高鈣血癥、貧血、腎臟損害。隨著近些年多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病率居高不下,治療MM的新療法大量涌現(xiàn),包括一般治療,造血干細胞移植,放療和化療。化療其中包括(靶向藥物如蛋白酶體抑制劑(硼替佐米、卡非佐米)和免疫調(diào)節(jié)劑等;糖皮質(zhì)激素如地塞米松、強的松等)。盡管對于MM患者的治療取得重大進展,但由于惡性腫瘤具有復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、耐藥的特性,導(dǎo)致當前階段MM患者預(yù)后不良。因而對于多發(fā)性骨髓瘤的研究刻不容緩。本課題前期通過高通量篩選出與MM患者疾病的發(fā)生發(fā)展存在密切聯(lián)系的BUB1B基因(BUB1有絲分裂檢查點絲/蘇氨酸激酶B,BUB1 Mitotic Checkpoint Serine/Threonine Kinase B)。并且通過基因芯片技術(shù)、MM患者臨床數(shù)據(jù)以及HOVON數(shù)據(jù)庫等,證實BUB 1B基因與MM患者疾病的發(fā)生發(fā)展密切聯(lián)系。因而課題的開展由此進行,首先通過構(gòu)建BUB1BOE和BUB1BKD...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1. BUB1B基因的介紹
    2. 染色體不穩(wěn)定性與腫瘤的相關(guān)性
    3. 骨髓微環(huán)境(環(huán)狀RNA)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)
    4. BUB1B的表達與多發(fā)性骨髓瘤患者生存率相關(guān)
    5. 本論文研究的思路和內(nèi)容
        5.1 BUB1B在多發(fā)性骨髓瘤細胞株的表型研究
        5.2 BUB1B過表達對染色體不穩(wěn)定性的影響
        5.3 骨髓微環(huán)境分泌的環(huán)狀RNA對MM細胞表型產(chǎn)生的影響
    6. 本論文的預(yù)期結(jié)果與意義
第二章 過表達和敲除BUB1B多發(fā)性骨髓瘤細胞株的構(gòu)建
    1. 前言
    2. 材料
        2.1 細胞、試劑與抗體
        2.2 實驗器材
    3. 方法
        3.1 細胞培養(yǎng)
        3.2 感受態(tài)制備
        3.3 TOP10感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化
        3.4 質(zhì)粒提取
        3.5 慢病毒包裝
        3.6 慢病毒轉(zhuǎn)染
        3.7 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)
    4. 結(jié)果和討論
        4.1 BCA測定蛋白質(zhì)濃度
        4.2 轉(zhuǎn)染BUB1B細胞株在細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)表達水平的檢測
    5. 小結(jié)
第三章 過表達BUB1B促進多發(fā)性骨髓瘤細胞株增殖
    1. 前言
    2. 材料
        2.1 細胞、試劑與抗體
        2.2 實驗器材
    3. 方法
        3.1 MTT增殖實驗
        3.2 流式細胞術(shù)檢測有絲分裂細胞周期
    4. 結(jié)果和討論
        4.1 過表達/敲低BUB1B對MM細胞增殖的影響
        4.2 過表達/敲低BUB1B對MM細胞周期的影響
    5. 小結(jié)
第四章 BUB1B促進MM細胞株染色體不穩(wěn)定性以及耐藥
    1. 前言
    2. 材料
        2.1 細胞、試劑與抗體
        2.2 實驗器材
    3. 方法
        3.1 外顯子測序
        3.2 吉姆薩染色
        3.3 免疫熒光染色
        3.4 免疫共沉淀實驗
    4. 結(jié)果和討論
        4.1 外顯子測序結(jié)果
        4.2 BUB1B過表達對MM細胞核型的影響
        4.3 BUB1B過表達對MM細胞染色體不穩(wěn)定性的影響
        4.4 BUB1B過表達對MM細胞株耐藥性的影響
        4.5 BUB1B蛋白相互結(jié)合的蛋白
    5. 小結(jié)
第五章 BUB1B環(huán)狀RNA34566在MM細胞株具有蛋白翻譯能力
    1. 前言
    2. 材料
        2.1 細胞、試劑與抗體
        2.2 實驗器材
    3. 方法
        3.1 總RNA提取
        3.2 總RNA完整性檢測
        3.3 RNase R酶處理
        3.4 Hiscript Ⅲ RT SuerMix for qPCR(+ gDNA Wiper)
        3.5 RT-PCR
        3.6 qRT-PCR
        3.7 電穿孔實驗
        3.8 Western blot實驗
        3.9 質(zhì)譜測序?qū)嶒?br>    4. 結(jié)果與討論
        4.1 MM細胞株是否存在內(nèi)源性BUB1B環(huán)狀RNA 34566
        4.2 sanger測序驗證外源性BUB1B環(huán)狀RNA 34566是否正確成環(huán)
        4.3 Western blot&蛋白質(zhì)譜驗證BUB1B環(huán)狀RNA 34566具有蛋白質(zhì)翻譯的能力
    5. 小結(jié)
第六章 BUB1B環(huán)狀RNA 34566促進MM細胞的增殖及染色體不穩(wěn)定性
    1. 前言
    2. 材料
        2.1 細胞、試劑與抗體
        2.2 實驗器材
    3. 方法
        3.1 MTT增殖實驗
        3.2 吉姆薩染色
        3.3 免疫熒光染色
    4. 結(jié)果與討論
        4.1 BUB1B環(huán)狀RNA 34566對MM細胞增殖的影響
        4.2 BUB1B環(huán)狀RNA34566對MM細胞株微核的影響
        4.3 BUB1B環(huán)狀RNA34566對MM細胞株染色體不穩(wěn)定性的影響
    5. 小結(jié)
全文總結(jié)和展望
參考文獻
附錄
    英文縮略語對照表
綜述
    參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果
致謝



本文編號：3755396