胃癌(gastric cancer,GC)是全球死亡率第二位的惡性腫瘤,胃癌的發(fā)病率高,治療效果差,根治率低,在消化道腫瘤中發(fā)病率和死亡率占第一位,是危害人類健康的主要惡性腫瘤之一。全球42%的胃癌患者發(fā)生在中國,每年新發(fā)病例數(shù)僅次于日本位居世界第二,并有逐年上升趨勢。盡管隨著手術(shù)、化療、放療和分子靶向治療技術(shù)的發(fā)展和綜合治療的應(yīng)用,延長了部分早期胃癌患者的生存期,但晚期胃癌5年生存率僅10%-20%,中位生存時(shí)間不超過1年。因此對于胃癌的現(xiàn)況應(yīng)該引起足夠的重視,而胃癌的發(fā)生機(jī)制的研究對于指導(dǎo)胃癌治療至關(guān)重要。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多步驟,多基因參與的過程,包括遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)的改變。但是由于技術(shù)的限制,很多機(jī)制尚未闡明。隨著基因測序和編輯技術(shù)的出現(xiàn)和發(fā)展,包括全基因組測序,轉(zhuǎn)錄組測序,外顯子測序,以及CRISPR/Cas9等基因打靶技術(shù),從基因和分子水平更好的了解腫瘤的發(fā)生。MACFl作為一種細(xì)胞骨架連接因子,可以與細(xì)胞骨架組分微絲微管相結(jié)合,并在細(xì)胞的生長發(fā)育以及維持組織結(jié)構(gòu)完整性中發(fā)揮相當(dāng)作用。MACFl是一種細(xì)胞骨架交聯(lián)因子,同時(shí)也是首個(gè)被認(rèn)為表達(dá)范圍廣泛并且能夠結(jié)合微絲微管細(xì)...

【文章頁數(shù)】：148 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮寫詞對照表
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 MACF1在胃癌中的表達(dá)情況及與臨床預(yù)后之間的關(guān)系
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4 討論
    5 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第二部分 CRISPR/Cas9靶向敲除MACF1基因改造胃癌細(xì)胞系
    第一章 Q-PCR和Westernblot篩選高表達(dá)胃癌細(xì)胞系
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    第二章 MACF1 CRISPR/Cas9質(zhì)粒載體構(gòu)建
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    第三章 gRNA和Reporter質(zhì)粒轉(zhuǎn)染JH293細(xì)胞并篩選
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    第四章 轉(zhuǎn)染目的胃癌細(xì)胞并流式分選單克隆培養(yǎng)
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    第五章 MACF1基因敲除成功的胃癌AGS/SNU-1 細(xì)胞系的篩選及鑒定
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4 討論
        5 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三部分 MACF1基因敲除對胃癌AGS細(xì)胞系體外生物學(xué)行為的影響
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4 討論
    5 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
結(jié)論
綜述
    綜述一 MACF1及斑蛋白家族的結(jié)構(gòu)功能和在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用
    綜述二 CRISPR-Cas9基因靶向修飾技術(shù)
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡歷
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表文章及參與課題
致謝



本文編號：3753858