目的肝癌在我國的發(fā)病率和死亡率位列前茅。隨著影像學不斷的發(fā)展,肝癌的早期診斷率也越來越高,外科根治性切除仍然是治療的金標準,但是仍有大量肝癌患者發(fā)現(xiàn)時已是晚期,因此,尋找早期肝癌診斷的生物標記物是我們目前研究的難題。目前為止,還沒有研究探索FANCI在肝細胞癌發(fā)生、發(fā)展中的機制作用,本研究旨在了解FANCI的功能失常是否參與肝細胞癌的發(fā)病過程;FANCI如何影響肝細胞癌的增殖、遷移、侵襲,為FANCI成為肝細胞癌診斷的標記物和治療新靶點奠定實驗基礎(chǔ)。實驗方法我們使用了q RT-PCR法確定了FANCI在HCC樣本和細胞系中的表達水平,結(jié)合隨訪數(shù)據(jù)和TCGA數(shù)據(jù)庫進行分析和預(yù)后的關(guān)系。體外功能實驗我們制備了si-FANCI瞬轉(zhuǎn)Hep3b細胞和Huh7細胞后,利用CCK-8測定法和集落形成實驗測定基因與細胞增殖關(guān)系;使用Transwell測定法評估細胞遷移和侵襲;利用流式細胞數(shù)檢測腫瘤細胞凋亡;通過免疫組化和蛋白印跡法鑒定FANCI蛋白在組織中含量。最后,體內(nèi)功能實驗通過裸鼠皮下成瘤異物種植實驗驗證了FANCI和腫瘤生長大小的關(guān)系。結(jié)果我們的結(jié)果表明,q RT-PCR檢測顯示FANCI在H... 

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料和方法
    1 臨床病理標本收集及隨訪
    2 細胞培養(yǎng)
    3 細胞轉(zhuǎn)染
    4 細胞增殖
    5 平板克隆形成
    6 Transwell遷移和侵襲實驗
    7 細胞凋亡檢測
    8 裸鼠成瘤實驗
    9 Real-time定量PCR分析
    10 Western-blot分析
    11 免疫組化學分析
    12 統(tǒng)計學分析
結(jié)果
    1 肝細胞癌樣本Real-time PCR分析Fanci癌基因表達情況
    2 Western-blot分析證實肝細胞癌樣本Fanci基因高表達
    3 篩選與FANCI基因高表達的陽性肝細胞癌細胞株
    4 FANCI基因表達與肝細胞癌患者預(yù)后的關(guān)系
    5 免疫組化檢測顯示FANCI基因在肝細胞癌組織中高表達
    6 基因敲減FANCI基因抑制肝癌細胞增殖
    7 FANCI基因敲除降低肝癌細胞克隆形成能力
    8 FANCI基因敲減抑制肝癌細胞的遷移和侵襲
    9 FANCI基因敲減促進肝癌細胞凋亡
    10 FANCI基因敲減抑制肝癌細胞裸鼠成瘤
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
縮略詞表
致謝



本文編號：3734455