背景及目的:肺癌源于肺部惡性腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖失控,是發(fā)病率和死亡率增長(zhǎng)最快、對(duì)人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。按照病理學(xué)分類,肺癌可以分為小細(xì)胞肺癌（Small Cell Lung Cancer,SCLC）和非小細(xì)胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC）。其中,85%的病例為NSCLC患者。非小細(xì)胞肺癌發(fā)生的根本原因是腫瘤細(xì)胞中頻繁地發(fā)生腫瘤驅(qū)動(dòng)基因EGFR或Ras突變。雙氫青嵩素（Dihydroartemisinin,DHA）是青蒿素的衍生物,屬于倍半萜類化合物,對(duì)惡性瘧原蟲具有強(qiáng)大快速的殺傷作用。研究發(fā)現(xiàn),除了具有抗瘧疾、抗炎癥、抗氧化、抗菌、抗病毒和抗糖尿病等功效外,DHA對(duì)肺癌、腸癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、結(jié)直腸癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌等不同類型的腫瘤細(xì)胞和動(dòng)物模型腫瘤有一定的抑制作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)DHA在抗腫瘤作用方面具有毒副作用小、多靶點(diǎn)、優(yōu)先選擇腫瘤細(xì)胞等優(yōu)點(diǎn),但是DHA單獨(dú)用藥處理在很多腫瘤類型中抑制腫瘤生長(zhǎng)效果有限,聯(lián)合用藥治療NSCLC似乎是一個(gè)更有前景的方案。ABT-263（Navitoclax）是針對(duì)于Bcl-2家族抗凋亡蛋... 

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要 Abstract 英文縮略詞表 第1章 引言
1.1 肺癌及其治療現(xiàn)狀
    1.1.1 肺癌發(fā)生及分類
    1.1.2 肺癌的治療
    1.1.3 靶向藥物
1.2 雙氫青蒿素概述
    1.2.1 雙氫青蒿素簡(jiǎn)介
    1.2.2 雙氫青蒿素抗腫瘤作用
1.3 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)與腫瘤發(fā)生
    1.3.1 JAK2-STAT3信號(hào)通路
    1.3.2 STAT3與腫瘤發(fā)生 第2章 課題立論依據(jù)、技術(shù)路線、研究意義
立論依據(jù)
技術(shù)路線
研究意義 第3章 雙氫青蒿素協(xié)同增強(qiáng)ABT-263抗腫瘤作用
3.1 引言
3.2 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2.1 細(xì)胞來源與細(xì)胞培養(yǎng)
    3.2.2 試劑與配置
    3.2.3 主要儀器設(shè)備
3.3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3.1 細(xì)胞凋亡測(cè)定
    3.3.2 高內(nèi)涵成像及細(xì)胞生長(zhǎng)率測(cè)定
    3.3.3 協(xié)同指數(shù)的測(cè)定
    3.3.4 克隆形成實(shí)驗(yàn)
    3.3.5 免疫印跡檢測(cè)蛋白表達(dá)水平
    3.3.6 慢病毒包裝
    3.3.7 sh-ctrl、sh-Bax穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的構(gòu)建
    3.3.8 數(shù)據(jù)分析
3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4.1 高內(nèi)涵觀察DHA、ABT或Comb處理下細(xì)胞生長(zhǎng)情況
    3.4.2 DHA、ABT雙藥處理的時(shí)間、劑量效應(yīng)探究
    3.4.3 DHA、ABT雙藥聯(lián)合具有協(xié)同作用
    3.4.4 雙藥聯(lián)合顯著抑制細(xì)胞生長(zhǎng)
    3.4.5 DHA、ABT雙藥聯(lián)合在EGFR或Ras突變的NSCLC中顯著引起凋亡
    3.4.6 蛋白免疫印跡結(jié)果顯示雙藥聯(lián)合上調(diào)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)
    3.4.7 敲低Bax顯著保護(hù)了雙藥引起的凋亡
3.5 小結(jié)與討論 第4章 DHA協(xié)同增強(qiáng)ABT-263引起細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制探究
4.1 引言
4.2 材料
    4.2.1 細(xì)胞來源與細(xì)胞培養(yǎng)
    4.2.2 試劑與配制
    4.2.3 主要儀器設(shè)備(同3.2.3)
4.3 實(shí)驗(yàn)方法
    4.3.1 A549細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染pCDNA3.1-survivin
    4.3.2 蛋白免疫印跡、流式技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡、結(jié)果統(tǒng)計(jì)(同3.2)
4.4 結(jié)果
    4.4.1 蛋白免疫印跡檢測(cè)Mcl-1在DHA處理后的表達(dá)水平
    4.4.2 基因敲減Mcl-1后ABT、Comb處理后細(xì)胞死亡率上升
    4.4.3 免疫印跡篩選抗凋亡和促凋亡蛋白成員及其表達(dá)變化
    4.4.4 持續(xù)激活Survivin后細(xì)胞死亡率下降
    4.4.5 敲低Bim后細(xì)胞死亡率下降
4.5 小結(jié)與討論 第5章 STAT3功能缺失促進(jìn)ABT-263引起細(xì)胞凋亡
5.1 引言
5.2 材料
    5.2.1 細(xì)胞來源與細(xì)胞培養(yǎng)(同3.2.1)
    5.2.2 試劑與配制
    5.2.3 主要儀器設(shè)備(同3.2.3)
5.3 方法
    5.3.1 蛋白質(zhì)磷酸化激酶芯片
    5.3.2 免疫印跡檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)水平(同3.3.5)
    5.3.3 數(shù)據(jù)分析
5.4 結(jié)果
    5.4.1 蛋白激酶芯片結(jié)果顯示DHA顯著抑制STAT3的活化磷酸化
    5.4.2 DHA抑制p-STAT3具有時(shí)間和劑量依賴效應(yīng)
    5.4.3 其他相關(guān)蛋白激酶在雙藥聯(lián)合中的作用
5.5 小結(jié)與討論 第6章 DHA通過抑制JAK2/STAT3下調(diào)Mcl-1、Survivin的表達(dá)增強(qiáng)ABT-263誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡
6.1 引言
6.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器設(shè)備
    6.2.1 細(xì)胞來源及細(xì)胞培養(yǎng)(同3.2.1)
    6.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及配置
    6.2.3 主要儀器設(shè)備
6.3 實(shí)驗(yàn)方法
    6.3.1 免疫印跡實(shí)驗(yàn)方法(同3.3.5)
    6.3.2 慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)方法(同3.2.6)
    6.3.3 克隆形成實(shí)驗(yàn)方法(同3.3.4)
    6.3.4 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)STAT3轉(zhuǎn)錄活性
    6.3.5 實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)方法
    6.3.6 pGreen-STAT3質(zhì)粒構(gòu)建
6.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    6.4.1 STAT3功能缺失后顯著增強(qiáng)ABT-263的細(xì)胞毒性
    6.4.2 STAT3功能增益后保護(hù)了聯(lián)合用藥引起的細(xì)胞凋亡
    6.4.3 敲低、過表達(dá)STAT3后克隆形成數(shù)變化
    6.4.4 JAK2是STAT3的上游分子
    6.4.5 Mcl-1、Survivin與STAT3變化呈正相關(guān)
    6.4.6 DHA抑制STAT3的轉(zhuǎn)錄活性
    6.4.7 DHA在轉(zhuǎn)錄水平抑制Mcl-1、Survivin的表達(dá)
6.5 小結(jié)與討論 第7章 DHA、ABT-263在體內(nèi)的抗腫瘤作用及機(jī)制研究
7.1 引言
7.2 材料
    7.2.1 細(xì)胞來源與裸鼠來源
    7.2.2 試劑與配制
    7.2.3 實(shí)驗(yàn)分組
7.3 方法
    7.3.1 裸鼠腫瘤模型構(gòu)建
    7.3.2 裸鼠灌胃
    7.3.3 免疫印跡
    7.3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
7.4 結(jié)果
    7.4.1 雙藥聯(lián)合抑制小鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)
    7.4.2 雙藥聯(lián)合抑制腫瘤生長(zhǎng)的分子機(jī)制探究
7.5 小節(jié)與討論 第8章 總結(jié) 參考文獻(xiàn) 致謝 攻讀碩士學(xué)位期間研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Artemisinin-Second Career as Anticancer Drug?[J]. Thomas Efferth.  World Journal of Traditional Chinese Medicine. 2015(04)
[2]Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記與Hoechst33342/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡的比較[J]. 張偉,梁智輝.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2014(11)



本文編號(hào)：3668743