本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在棕櫚酸誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)信號(hào)調(diào)控對(duì)棕櫚酸(palmitic acid,PA)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制。方法:本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721,用衣霉素(tunicamycin,Tun)作為誘導(dǎo)ERS的陽(yáng)性對(duì)照,用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑4-苯丁酸(4-phenyl butyric acid,PBA)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的活化,用PA進(jìn)行處理誘導(dǎo)脂代謝紊亂,用葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染模擬GRP78高表達(dá)。處理SMMC-7721細(xì)胞后,反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測(cè)時(shí)間梯度PA處理的SMMC-7721細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激活化的分子標(biāo)志物;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)ERS活化分子標(biāo)志物在mRNA水平的誘導(dǎo);顯微鏡下觀察SMMC-7721細(xì)胞死亡;Annexin V-FITC流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)SMMC-7721細(xì)胞的凋亡情況;Western blot技術(shù)檢測(cè)SMMC-7721細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激活化的相關(guān)分子和凋亡相關(guān)分子等。結(jié)果:(1)PA誘導(dǎo)了肝癌細(xì)胞SMMC-7721發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng):RT-PCR結(jié)果表明PA不僅誘導(dǎo)了XBP1的活化剪切,也誘導(dǎo)了CHOP和GRP78在轉(zhuǎn)錄水平的增加,實(shí)時(shí)熒光定量PCR也證實(shí)了PA對(duì)ERS活化分子標(biāo)志XBP1、CHOP和GRP78在mRNA水平的誘導(dǎo)。(2)PA誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞死亡:光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)發(fā)現(xiàn)SMMC-7721細(xì)胞出現(xiàn)了時(shí)間依賴(lài)性死亡。(3)PA誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡:Western blot結(jié)果表明PA誘導(dǎo)了SMMC-7721細(xì)胞呈時(shí)間依賴(lài)性的PARP活化剪切;Annexin V-FITC流式細(xì)胞檢測(cè)表明PA誘導(dǎo)了SMMC-7721細(xì)胞發(fā)生時(shí)間依賴(lài)性凋亡(P0.001)。(4)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激促進(jìn)PA誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡:Western blot結(jié)果表明使用PBA明顯降低了PA對(duì)SMMC-7721細(xì)胞PARP活化剪切的誘導(dǎo);Annexin V-FITC流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果也表明PBA處理顯著抑制了PA誘導(dǎo)的SMMC-7721細(xì)胞凋亡(P0.001)。(5)肝癌細(xì)胞SMMC-7721耐受內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑Tun誘導(dǎo)的凋亡:Western blot結(jié)果表明Tun處理SMMC-7721細(xì)胞沒(méi)有引起明顯的PARP活化剪切;流式細(xì)胞檢測(cè)凋亡的結(jié)果也表明Tun幾乎沒(méi)有誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞發(fā)生凋亡。(6)PA和Tun差異性誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞UPR信號(hào)系統(tǒng):RT-PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,與Tun相比,PA誘導(dǎo)的XBP1活化出現(xiàn)晚但誘導(dǎo)活化的高水平維持時(shí)間長(zhǎng);Western blot結(jié)果也顯示PA誘導(dǎo)的GRP78明顯低于Tun的誘導(dǎo)作用。(7)GRP78抑制PA誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞SMMC-7721凋亡:Western blot和流式細(xì)胞結(jié)果均表明過(guò)表達(dá)GRP78明顯抑制了PA誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞凋亡(P0.05)。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)在PA誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞SMMC-7721凋亡中的重要作用,GRP78的表達(dá)不足與PA誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞凋亡密切相關(guān),GRP78可望成為治療脂代謝紊亂性肝病的潛在靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng) 凋亡 棕櫚酸 葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-9
• 前言9-14
• 材料和方法14-25
• 結(jié)果25-38
• 討論38-45
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 英漢縮略名詞對(duì)照表51-53
• 附錄 膽管癌細(xì)胞中IL-6/Stat3通路對(duì)c-Met的調(diào)控53-64
• 前言54-56
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器56
• 2 方法56-57
• 結(jié)果57-59
• 討論59-61
• 參考文獻(xiàn)61-64
• 致謝64-65
• 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與腫瘤 綜述65-80
• 參考文獻(xiàn)74-80

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本文編號(hào)：366725