人肝細胞癌是位于世界第三位導(dǎo)致患者死亡的惡性腫瘤,是嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病。手術(shù)是最為有效而確切的治療手段,但由于肝癌起病隱匿且惡性程度高,大部分患者發(fā)現(xiàn)時即已屬晚期,喪失手術(shù)機會,故化療仍然是晚期肝癌治療的重要手段,但肝癌的多藥耐藥性的發(fā)生常導(dǎo)致治療失敗。目前研究表明,肝細胞癌等惡性腫瘤常高表達Bcl-2蛋白家族內(nèi)Bcl-2、Bcl-XL等抗凋亡蛋白,通過調(diào)節(jié)抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白間的平衡,使腫瘤發(fā)生凋亡逃逸。因此抑制Bcl-2的過表達將成為一種有效的腫瘤治療方法。目前開發(fā)出的ABT-737是一種BH3蛋白模擬物,能夠特異性地抑制Bcl-2/Bcl-XL等在BH3結(jié)構(gòu)域與Bax/Bak的結(jié)合,從而誘導(dǎo)凋亡。諸多學(xué)者認(rèn)為自噬可以在腫瘤形成的初始階段起到抑制作用,但后期腫瘤細胞往往可通過自噬應(yīng)答降低化療藥物的殺傷作用。研究表明,自噬通過降解受損的細胞器及細胞內(nèi)老化蛋白質(zhì)等,促進細胞修復(fù)和生存,在治療中常使腫瘤細胞免受凋亡和壞死,成為腫瘤耐藥的重要的機制之一。目前臨床上亦采用Bcl-2抑制劑ABT-737進行肝細胞癌治療的研究,但由于ABT-737可以通過某些因素誘導(dǎo)自噬,常導(dǎo)致耐藥的... 

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語索引
第1章 文獻綜述
    1.1 肝細胞癌
        1.1.1 概述
        1.1.2 肝細胞癌的治療
    1.2 Bcl-2 蛋白家族
        1.2.1 Bcl-2 蛋白家族概述
        1.2.2 Bcl-2 蛋白家族調(diào)節(jié)細胞凋亡
        1.2.3 Bcl-2 蛋白家族調(diào)節(jié)細胞自噬
        1.2.4 以Bcl-2 蛋白為靶點的小分子化合物ABT-737
    1.3 凋亡
        1.3.1 概述
        1.3.2 凋亡和自噬的關(guān)系
    1.4 自噬
        1.4.1 概述
        1.4.2 自噬與腫瘤耐藥
        1.4.3 活性氧（ROS）與自噬
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實驗試劑
        2.1.2 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 細胞增殖實驗
        2.2.3 細胞凋亡檢測
        2.2.4 ROS檢測
        2.2.5 蛋白濃度的測定
        2.2.6 Westernblot
        2.2.7 免疫熒光標(biāo)記及激光共聚焦顯微鏡
        2.2.8 TUNEL檢測法
        2.2.9 細胞瞬時轉(zhuǎn)染及Beclin1基因敲除
        2.2.10 統(tǒng)計分析
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 ABT-737 抑制人肝癌阿霉素耐藥細胞株HepG-2/ADM細胞生長并誘導(dǎo)細胞凋亡
        3.1.1 HepG-2/ADM細胞的Bcl-2 蛋白表達水平高于HepG-2 細胞..293.1.2 ABT-737 抑制Hep G-2/ADM細胞生長
        3.1.2 ABT-737 誘導(dǎo)Hep G-2/ADM細胞凋亡
    3.2 ABT-737 誘導(dǎo)人肝癌阿霉素耐藥細胞株HepG-2/ADM細胞Beclin1依賴的自噬
        3.2.1 ABT-737 誘導(dǎo)Hep G-2/ADM細胞自噬
        3.2.2 ABT-737 誘導(dǎo)HepG-2/ADM細胞發(fā)生Beclin1依賴的自噬..37
    3.3 ABT-737 誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生并誘導(dǎo)人肝癌阿霉素耐藥細胞株HepG-2/ADM細胞發(fā)生ROS介導(dǎo)的自噬
        3.3.1 ABT-737 誘導(dǎo)Hep G-2/ADM細胞中ROS的生成
        3.3.2 ABT-737 誘導(dǎo)Hep G-2/ADM細胞發(fā)生ROS介導(dǎo)的自噬
    3.4 抑制ROS能增加ABT-737 誘導(dǎo)的人肝癌阿霉素耐藥細胞株HepG-2/ADM細胞凋亡
    3.5 抑制自噬能增加ABT-737 誘導(dǎo)的人肝癌阿霉素耐藥細胞株HepG-2/ADM細胞凋亡
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3663649